巨桉金属耐受蛋白EgMTP6的分子特征及功能

【目的】筛选巨桉金属耐受蛋白基因EgMTP6,分析其生物信息学特征、亚细胞定位、锌转运功能和表达模式,揭示丛枝菌根真菌、锌、磷与EgMTP6的相互关系,探究其在缓解锌胁迫中的作用。【方法】通过生物信息学分析,得到EgMTP6的核苷酸和氨基酸序列特征。利用农杆菌注射烟草叶表皮细胞分析EgMTP6的亚细胞定位,酵母突变体互补分析EgMTP6转运锌的功能。利用荧光定量PCR技术,分析锌(ZnSO₄)、磷(NaH₂PO₄)和异形根孢囊霉对EgMTP6表达模式的影响。【结果】基因预测显示：EgMTP6包含一个长度为1 524bp的开放阅读框,编码507个氨基酸,包含12个外显子和11个内含子。结构预测显示：EgMTP6蛋白氨基端位于膜内侧,羧基端位于膜外侧,包含5个跨膜螺旋和HD-HD基序。系统进化分析表明：EgMTP6属于Group6,归为Fe/Zn-CDF类群。多序列比对发现,MTP6含有亚铁离子外排泵结构(Ferrous-iron efflux pump, FieF)。亚细胞定位显示EgMTP6定位在内质网,酵母突变体互补表...     

茯苓菌属遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记对8个不同来源的茯苓菌株进行指纹图谱分析.在选用的10个ISSR引物中,有2条引物建立了8个菌株的指纹图谱,能将所有供试菌株相互区分开来并表现出丰富的遗传多样性.用NTSYS软件进行聚类分析,可将8个供试茯苓菌株分为2个类群:类群Ⅰ包括6个菌株,可进一步划分为2个亚类;类群Ⅱ包括2个菌株;菌株岳西和闽006的遗传距离最近.     

百脉根LysM型受体LcLRK1参与菌根真菌丛枝形成

从日本百脉根(Lotus corniculatus)中克隆到一个可能与菌根因子识别相关的Lc LRK1基因,通过设计简并引物并利用RACE PCR手段,在百脉根中扩增得到Lc LRK1基因全长序列。通过生物信息学的方法,对Lc LRK1基因进行结构分析和预测;接种Rhizophagus irregularis,检测Lc LRK1基因在百脉根不同组织中的表达水平;构建Pro Lc LRK1∶∶GUS重组载体,观察Lc LRK1基因在根中的表达部位;最后通过RNA干扰(RNAi)技术进行Lc LRK1基因沉默。结果表明:Lc LRK1编码一个Lys M型受体激酶,由3个胞外Lys M结构、1个跨膜结构域与1个胞内激酶结构域组成;Lc LRK1在AM共生早期表达水平明显增强,并在根的表皮细胞及根毛基部表达;Lc LRK1基因沉默后抑制了早期丛枝的形成;相对于对照组,在Lc LRK1RNAi的植株中AM真菌的侵染率明显下降,丛枝数目也明显降低。证实Lc LRK1基因与菌根真菌信号分子识别相关,并且影响AM真菌丛枝的形成。     

桉树内生真菌二型伞霉的培养条件优化

明确桉树内生真菌二型伞霉的最适培养条件,为桉树内生真菌共生机制研究以及内生真菌的实际生产应用奠定基础。采用固体培养和液体培养,研究不同温度(20、25、30、35℃)、pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0)、碳源(葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、果糖、乳糖和山梨醇)、氮源(磷酸氢二铵、草酸铵、硫酸铵、氯化铵、尿素、胰蛋白胨和蛋白胨)、转速(80、100、120 r/min和140 r/min)对二型伞霉生长的影响。同时回接巨桉,测量其株高与根长,探究接种二型伞霉对巨桉的影响。结果表明,二型伞霉在不同碳源和不同氮源的MMN培养基均能生长,但生长速度和生物量存在显著差异,最佳碳源为乳糖,其次是葡萄糖,最佳氮源为蛋白胨,其次是尿素。二型伞霉适宜生长温度为30℃,生长最快、长势最好,适宜生长pH为6.0～7.0,最佳转速为80 r/min。接种二型伞霉2个月后巨桉株高和根长分别比对照显著提高48.22%和75.78%。初步确定了桉树内生真菌二型伞霉的最佳培养条件,验证了其对桉树生长的促进作用,为桉树内生真菌的生理生化研究和资源的开发利用提供理论依据。