湛江地区罗非鱼病原菌分离鉴定及毒力基因检测

[目的]了解湛江市某水产养殖场患病罗非鱼病原菌携带毒力基因情况。[方法]从10尾患病罗非鱼心脏、肠道、脾、肝脏等器官分离细菌,提取分离纯化细菌的总DNA,PCR扩增16S rDNA基因后经过基因测序鉴定细菌,并利用PCR技术检测分离菌株的毒力基因。[结果]从罗非鱼内脏中分离的细菌为华纳葡萄球菌、大肠杆菌和粪肠球菌,在毒力基因检测中发现华纳葡萄球菌携带毒力基因gap,大肠杆菌携带毒力基因pap、afa,粪肠球菌携带毒力基因efaA、cylM、cylB。[结论]该研究结果可为湛江地区罗非鱼细菌性疾病防控提供理论依据。     

红树林植物内生菌分离鉴定及其抑菌活性研究

[目的]从红树林植物组织中分离出对动物病原菌具有广谱抑菌活性的植物内生菌。[方法]以铜绿假单胞菌、多杀性巴氏杆菌、产气肠杆菌、粪肠球菌4种常见的致病菌作为指示菌,采用M10和P3培养基从红树林植物根、茎、叶组织中分离内生菌,以固体琼脂打孔法筛选具有抑菌活性的菌株,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S rDNA基因并测序,通过邻接法构建系统发育树。[结果]从红树林植物组织中共分离857株可培养的内生菌,有145株菌有抑菌活性,占分离菌株的16.6%。其中通过M10培养基从红树林植物叶组织分离的菌株32-5对铜绿假单胞菌、产气肠杆菌都具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径分别为38和42 mm;通过P3培养基从红树林植物茎组织分离的菌株12-4对粪肠球菌具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径为56 mm;通过M10培养基从红树林植物茎组织分离的菌株13-2对多杀性巴氏杆菌具有最强抑菌活性,其抑菌圈直径为64 mm。有抑菌活性菌株分为10个属,其中芽孢杆菌属是优势菌属。[结论]该试验初步揭示红树植物根、茎、叶组织中植物内生菌的抑菌活性和多样性,为开发新型抗菌药物及应用提供理论依据。     

36种中药提取物对罗非鱼大肠杆菌和华纳葡萄球菌的抑菌效果研究

研究36种中药对罗非鱼大肠杆菌和华纳葡萄球菌的体外抑菌效果。采用水提法提取芦根、地榆、苦参、黄芩、大青叶、黄柏、丁香、蛇床子、连翘、金银花、栀子、山楂、黄连等36种中药有效成分,采用肉汤二倍稀释法测定中药提取物对大肠杆菌和华纳葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),选择抑菌效果较好的单药进行联合抑菌试验。结果表明,山楂对罗非鱼大肠杆菌抑菌效果最佳,MIC值为31.250 mg/mL;栀子、地榆、丁香对罗非鱼华纳葡萄球菌抑菌效果较好,MIC值为62.500 mg/mL。联合用药结果显示,在对大肠杆菌的体外抑菌试验中,大青叶与地榆、大青叶与黄连、大青叶与山楂、地榆与丁香、地榆与山楂、丁香与黄连、丁香与山楂、黄连与山楂等药物联合均为拮抗作用(FIC指数>2.000),其余发生沉淀反应;在对华纳葡萄球菌的体外抑菌试验中,只有山楂和黄连联用时有相加作用,其FIC值为1.000,其余均为无关作用或发生沉淀反应。由此可见,两种中药进行联合用药有可能产生无关甚至拮抗等作用,反而导致抑菌活性降低。     

红树植物根际土壤细菌分离鉴定及抑菌活性的研究

为了从红树林植物根际土壤中分离出具有广谱抑菌作用的海洋细菌，试验以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌4种常见致病菌为指示菌，采用M10和P3培养基从红树植物根际土壤中分离细菌，以固体琼脂打孔法对分离的细菌进行抑菌活性筛选，并提取分离菌株的基因组DNA,PCR扩增16S rDNA基因并测序，同时采用邻接法构建系统发育树。结果表明：从红树植物土壤中分离得到654株细菌，其中107株细菌具有抑菌活性，占分离菌株的16.4%。菌株M36对大肠杆菌和链球菌抑菌活性最强，抑菌圈直径分别为13 mm、16 mm;菌株P19和P25对金黄色葡萄球的抑菌活性最强，抑菌圈直径均为16 mm;菌株P83对沙门氏菌抑菌活性最强，抑菌圈直径为13 mm;菌株M36和P31的抑菌谱最广。综合两种培养基的培养结果有抑菌活性的菌株被分成4个属，分别是肠杆菌属、芽孢杆菌属、葡萄球菌属、伯克霍尔德氏菌属，其中肠杆菌属为优势菌属，其次为芽孢杆菌属，占比分别为69.2%和15.9%。说明红树植物根际土壤中存在具有广谱抑菌活性的细菌。