β变形菌多聚磷酸激酶PPK2的原核表达及纯化

多聚磷酸激酶2(Polyphosphate kinase 2, PPK2)在众多病原菌的致病性中发挥重要作用,而人等后生动物体内未发现ppk2基因,因而PPK2是新型抗生素开发的靶点。为探索β变形菌CB中PPK2在大肠埃希菌中的可溶性表达,获得纯度、浓度均可用于蛋白质晶体学研究的PPK2蛋白。首先,采用生物信息学方法对PPK2蛋白的基本理化性质和二级结构进行预测,利用限制性核酸内切酶酶切位点NdeΙ和HindⅢ将ppk2基因插入到原核表达载体pET30a中,并通过全质粒酶切法和目的基因测序确认重组表达载体PPK2/pET30a的准确性;接下来,重组表达载体通过物理法转入大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中,利用IPTG诱导目的蛋白PPK2在37℃、25℃和16℃下试表达,并通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定分析表达产物;最后,利用3 L表达菌液进行放大培养,表达产物先后经Ni-IDA亲和色谱柱、阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱分离纯化。结果显示:大肠原核表达系统可在16℃、终浓度为0.2m M·L~(-1)的IPTG诱导下稳定高效表达以可溶性单体形式存在的,相对分子质量约为35 ku的PPK2蛋白;放大培养中产生的PPK2蛋白经系列色谱法纯化后浓度可达12 mg·mL~(-1),纯度为95%,可用于PPK2蛋白的结构和功能研究。     

疗效性干酪乳杆菌制品的开发探讨

疗效性干酪乳杆菌制品的开发探讨张和平，许凤霞（内蒙古农牧学院食品工程学）（内蒙古巴盟农业学校）干酪乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｅｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）是健康人体肠道中的正常菌之一，为长短不等杆菌，在乳中生长良好，但发育较慢，最适生长温度为３０℃，微好氧或厌...     

添加剂与畜禽疾病

现代养殖业以集约化和工厂化为主要生产方式，特点是环境远离自然，饲养密度大，营养需要受人的控制，在这样的条件下，饲养管理的某一个环节出现问题，都会使畜禽不能适适应环境而致病，尤易导致营养代谢疾病的发生。我国的饲养管理水平和饲料加工业不尽完善，全价配合饲料（平衡饲料）普及率低，品种偏少，畜禽营养代谢疾病时有发生，轻者使畜禽生产力下降，重者导致畜禽大量死亡。为了解决这一困扰畜牧业生产的难题，除加强饲养管理外，主要应在日粮中添加相应的饲料添加剂，从根本上控制营养代谢疾病。饲料添加剂可完善日粮的全价性，提…     

浅谈规模化牧场奶牛发情鉴定方法

众所周知,牧场主要效益来源于奶牛产奶,母牛产犊后才能产奶。因此,牧场要将奶牛配种率提上去,提高配种率的主要措施就是要做好奶牛的发情鉴定工作。通过发情鉴定,不但可以判断奶牛发情是否正常,发现问题,及时解决,还可以判断奶牛的发情阶段,以便确定配种时间,从而提高受胎率。