7S大豆球蛋白α-亚基的原核表达及分离纯化

为制备重组7S大豆球蛋白α-亚基,构建重组表达质粒pET-28a-α并导入大肠杆菌.对重组蛋白的表达条件进行筛选,在OD600为0.6,30℃培养9h的培养液中,目的 蛋白占总蛋白的25.83％.采用镍亲和色谱柱和含350 mmol/L咪唑的磷酸盐缓冲液进一步纯化.在毫克级范围内获得纯度达70.0％的目标蛋白,为进一步...     

重组大豆7S球蛋白α′-亚基的分离纯化

为分离及纯化重组大豆7S球蛋白(β-conglycinin)α′-亚基,将大肠杆菌工程菌pET-28a-α′-BL21经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,得到含有重组7S球蛋白α′-亚基目的蛋白的菌液,再经超声破碎、离心得到粗提的重组蛋白。采用AKTA蛋白纯化系统利用Ni 2+亲和层析柱进一步纯化重组蛋白,当采用流速为5mL/min的平衡液平衡Ni 2+柱可以得到较高纯度的目的蛋白,纯度可达89.1%。