沙棘多糖的提取纯化及其对巨噬细胞的作用研究

本文以内蒙古大果沙棘为材料,用超声裂解法结合热水提取法提取沙棘多糖。并用Sevage法结合木瓜蛋白酶法除蛋白,SephadexG-150进行柱层析,提取并纯化出沙棘多糖冻干纯品HPRⅠa,并对其进行纯度鉴定。用MTT法和中性红法初步探讨沙棘多糖对RAW264.7巨噬细胞的作用。发现随着多糖作用浓度的增加,RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬能力也随之增强,作用浓度达到300μg/mL时细胞的增殖活性基本达到一个平台期。由此可已初步判断HPRⅠa对巨噬细胞具有明显的促增殖作用。     

乳腺癌细胞中Rab7基因的克隆及序列分析

本实验主要是从人乳腺癌细胞中克隆Rab7基因并进行基因序列比对和分析。通过培养乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板,根据GenBank公布的人Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pc-DNA3.1连接,构建pcDNARab7重组质粒。测序后发现MCF-7细胞中克隆的Rab7序列与GenBank序列的同源性为91%,发生了多处突变,其中94.4%为同义突变,5.5%为错义突变。但是MDA-MB231细胞中克隆的Rab7基因序列与GenBank中的Rab7序列的同源性为100%。由于发现Rab7在MCF-7乳腺癌细胞中发生突变,而在MDA-MB-231乳腺癌细胞中基因未发生突变,我们推测Rab7基因的突变是否与乳腺癌的产生有关系,这个发现为以后研究Rab7与乳腺癌的关系奠定了基础。