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采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。 相似文献
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猪弓形虫病的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人畜共患病,不但在公共卫生上有很重要的意义,对养猪生产也曾造成过巨大经济损失。近年来,各国学者在猪弓形虫病的流行病学、临床表现、诊断方法以及防治等方面都进行了研究,本文就该病进行简要概述。 相似文献
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应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测. 相似文献
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弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达 总被引:11,自引:1,他引:11
根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础. 相似文献
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介绍了组合预测方法的基本原理,对基于该方法的大气质量中长期预测进行了详细地研究,并以某项目为例,对组合预测方法中的Aermod模式在大气环境评价中的有效应用展开了探讨,以期促进大气环境评价工作更好开展。 相似文献
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根据编码rAs37的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术从猪蛔虫感染性虫卵的cDNA中扩增编码rAs37的部分基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus, IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的rAs37基因与GenBank中相应基因序列(AB078971)的同源性达100%,表达的rAs37融合蛋白表观相对分子质量约为60 000,且可被兔抗猪蛔虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立猪蛔虫早期诊断方法和研制猪蛔虫的亚单位疫苗奠定了基础. 相似文献
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以桑树品种育71-1枝条为材料,通过硬枝扦插人工诱导生根,研究并分析了这一过程中插穗顶芽下皮层(上部皮层)和基部皮层的含水率、营养物质、渗透调节物质等的动态变化以及生根过程中相关氧化酶的活性变化。结果表明:在扦插生根过程中,上部皮层的含水率无明显变化,而基部皮层的含水率先稳步升高后趋于稳定;插穗基部皮层的可溶性糖、脯氨酸、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性,均呈现先急剧下降后相对稳定的变化趋势,上部皮层的表现类似;插穗基部皮层的吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性,呈先升高后降低的趋势,多酚氧化酶(PPO)活性逐渐升高,过氧化物酶(POD)活性呈现升—降—升的趋势,超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐下降,过氧化氢酶(CAT)活性则呈现波浪式上升,内部氧化酶类活性的动态变化与生根过程密切相关;而上部皮层的抗氧化酶系统活性变化不大,IAAO和PPO的活性在第12天后表现为相反的变化趋势。硬枝扦插生根过程中的生理生化指标的拐点出现在第3、6、12、18天,与愈伤组织诱导期、不定根诱导初期、不定根形成期、不定根伸长期相对应。 相似文献
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应用PCR技术从刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2(rh—potryprotein2)的部分基因,构建pGEX—KG—ROP2重组表达质粒,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转入E.coli BL21CodonPlus中,在IPTG诱导下表达,表达产物用SDS—PAGE和Western—blot分析鉴定。结果表明,扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9%,该基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000,可被兔抗弓形虫免疫血清识别。 相似文献
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应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。 相似文献