厚朴分子标记技术应用现状及建议

目前应用于厚朴上的分子标记类型有AFLP、RAPD、AP PCR、DAF及SRAP.该文分别综述了这几种分子标记技术在厚朴上的应用现状、主要优缺点并提出建议.认为厚朴分子标记研究还处于初级阶段,今后应继续对现有成果深入研究并积极开展分子标记技术在厚朴分子标记辅助育种（MAS）和保育生物学上的应用研究.此外,建议未来可建立适用于厚朴的TRAP技术体系并展开相应研究.     

凹叶厚朴TRAP-PCR体系建立

结合均匀试验与正交试验对影响目标区域扩增多态性—聚合酶链式反应(TRAP-PCR)效果的5个关键因素(DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物及Taq酶)进行优化研究,建立了适用于凹叶厚朴目标区域扩增多态性(TRAP)分析体系。凹叶厚朴TRAP-PCR最优反应体系:总体积25μL,含模板DNA 40 ng,Mg2+1.5 mmol·L-1,dNTPs 0.28 mmol·L-1,固定引物及随机引物0.3μmol·L-1,Taq DNA聚合酶0.75 U。PCR扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,40℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;将退火温度升至50℃,其它条件不变进行38个循环;72℃延伸10 min。利用所得优化体系对16个不同种源凹叶厚朴进行扩增,结果表明该体系效果较好,可应用于凹叶厚朴相关研究。