抗猪瘟病毒E2蛋白单抗9A4H4的鉴定

为鉴定抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体9A4H4与不同猪瘟病毒(CSFV)株的反应性,将其与猪瘟病毒石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株和前期分离获得的106株猪瘟流行毒株进行IFA验证。在此基础上,利用昆虫杆状病毒系统表达的基因1型、2型和3型代表性毒株的E2蛋白进行了Western blot验证。试验还利用含有或不含β-巯基乙醇的SDS上样缓冲液对真核表达和原核表达的石门株E2蛋白进行处理,并与单抗9A4H4进行反应,初步鉴定了该单抗所识别抗原表位的类型,并利用石门株进行中和试验验证该抗体对CSFV的中和能力。间接免疫荧光试验结果表明:单抗9A4H4能与石门株、猪瘟兔化弱毒疫苗株、基因1型以及大多数的基因2.1b亚亚型、2.2、2.3基因亚型的毒株反应,与绝大多数的2.1a、2.1c、2.1g和2.1h基因亚亚型的毒株不反应,该结果与单抗和病毒E2蛋白的反应结果完全一致。Western blot结果表明:单抗9A4H4只与真核表达的非还原型石门株E2蛋白反应,与真核表达的还原型E2蛋白以及原核表达的石门E2蛋白不反应,表明该抗体识别的抗原表位为构象表位。中和试验结果表明,单抗9A4H4对CSFV...     

我国猪瘟病毒2.1c亚型优势流行株的全基因组序列分析

为了揭示我国猪瘟病毒2.1c流行株的基因组特征,对从1998年和2011—2018年收集的8个2.1c流行株进行全基因组序列测定和比较分析。结果表明：基因2.1c流行株之间的基因组序列同源性为96.3%～99.1%,多聚蛋白的氨基酸同源性为98.2%～99.3%,这些毒株与疫苗C株的基因组和多聚蛋白同源性分别为83.9%～84.7%和91.7%～92.4%。多聚蛋白氨基酸比对发现,2.1c流行株相比于疫苗株至少有260个氨基酸替换位点,其中E^rns蛋白的替换比例最高,其次为NS5A,Core和E2。选择压力分析显示,猪瘟病毒2.1c流行株多聚蛋白的选择压力测度参数ω<1,表明其正承受着纯化选择压力,同时发现14个正向选择位点分布于7个病毒蛋白上。基于E2基因的进化分析显示,2.1c流行株的E2基因平均进化速率为1.862×10^-3个替换/位点/年,高于所有基因型毒株E2基因的进化速率(9.547×10^-4个替换/位点/年)。研究系统地分析了基因2.1c亚型流行株的进化特点及其与C株的遗传差异,结果有助于进一步研究猪...     

葡萄糖促进猪瘟病毒增殖的研究

病毒依赖宿主细胞代谢以获取复制所需的能量和生物合成分子。为探索葡萄糖和谷氨酰胺在猪瘟病毒增殖中的作用,将剥夺了葡萄糖和谷氨酰胺或加有不同浓度葡萄糖和葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)的培养基用于猪瘟病毒感染细胞的培养,感染后24 h收集样品,进行病毒滴度和基因组拷贝数测定,以及病毒蛋白表达的鉴定。结果表明:与正常对照相比,谷氨酰胺剥夺对病毒滴度没有显著影响,而葡萄糖剥夺时病毒滴度和基因组拷贝数分别降低30倍和20倍,同时病毒滴度与葡萄糖的浓度呈正相关。表明葡萄糖是猪瘟病毒增殖的必需营养物质。2-DG处理也能显著抑制猪瘟病毒的增殖。综上,葡萄糖对猪瘟病毒增殖至关重要,缺少葡萄糖则猪瘟病毒无法正常复制,而谷氨酰胺对猪瘟病毒增殖并无影响。