水貂出血性肺炎二联四价灭活疫苗的研制

为预防水貂出血性肺炎的发生,制备了水貂二联四价灭活疫苗,并进行了评估。对强致病性E、G和D型铜绿假单胞菌及H11基因型大肠杆菌进行了菌株的灭活,制备疫苗,对疫苗进行安全性检查、超剂量检查、最小免疫剂量确定、水貂攻毒保护试验及初步临床应用。结果表明,菌株灭活完全,平板上未见单一菌落出现,疫苗初步制备完成且安全检查试验中试管内未出现浑浊,超剂量检查试验中接种水貂未见不良反应。最小免疫剂量为0.5mL(5.0×108CFU)时对水貂起到完全保护,此时感染剂量为10 LD50个细菌,初步临床应用效果较好。本研究针对由铜绿假单胞菌和大肠杆菌感染引起的水貂出血性肺炎的预防和二联四价灭活疫苗的使用提供参考依据。     

犬细小病毒JL-M13株的分离鉴定及全基因组序列分析

将检测为犬细小病毒(CPV)阳性的病料经处理后接种F81细胞盲传3代并获得一株细小病毒,命名为JL-M13。应用重叠PCR技术从JL-M13中扩增出5条核苷酸序列,拼接后进行序列分析。结果表明,所获病毒核酸基因组大小为4 621bp,与其他犬细小病毒的基因相似性为98.2%~99.4%。系统发育树分析表明,JL-M13与CPV-2毒株(EF011664.1)相似率最高,与Type-2型犬细小病毒疫苗株相距较远。     

胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用

自胶体金标记技术问世以来,已在妊娠检测、传染病、毒品、食品安全和兽医等领域得到了广泛的应用.就兽医领域而言,已应用在动物寄生虫、细菌、病毒以及兽药残留检测等方面.论文总结了胶体金免疫层析技术的基本原理和常见的检测抗原、抗体的方法,对胶体金免疫层析技术在动物病毒抗原和抗体检测中的应用进行了详细的介绍,并对该技术在动物病毒...     

犬细小病毒病实验室诊断方法研究进展

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种急性、烈性传染病。通过分析犬细小病毒病现有的诊断手段,对犬细小病毒病的预防和控制具有重大意义。目前常用的犬细小病毒病监测指标主要包括CPV、CPV DNA、CPV抗原、抗-CPV抗体。核酸监测由于快速,方便操作、灵敏的特点,被认为是实验室常用诊断手段,也是"金标准",对发病或隐性带毒犬都有特别的优势。CPV抗原作为现症感染指标、抗-CPV抗体作为现症感染和既往感染的指标,基于此建立的ELISA、胶体金试纸条大大节约了检测时间。文中将从犬细小病毒免疫原诊断以及分子生物学诊断两方面将其实验室诊断方法的研究进展进行综述。     

水貂病毒性肠炎巢式PCR,PCR-RFLP联合诊断方法的建立

根据水貂肠炎细小病毒的VP2基因序列设计4条特异性引物,建立了检测水貂肠炎细小病毒的巢式PCR方法。采用一次扩增的敏感性来检测5个TCID50/mL的细小病毒MEVB株,二次扩增的敏感性来检测0.05个TCID50/mL的细小病毒MEVB株。同时,利用该方法第一轮PCR产物酶切,能够区分犬细小病毒与水貂肠炎细小病毒,具有重要的实用价值和应用的前景。     

犬用四联疫苗免疫试验

用CDV弱毒、CPV弱毒、CAV 2型弱毒和ERA弱毒成功研制了犬用四联疫苗。该四联疫苗安全可靠 ,免疫原性强 ,免疫期 6个月以上。该四联疫苗免疫剂量为 3mL/只 ,CDV、CPV和CAV 2型和ERA弱毒疫苗效价为 10 6 0 ～ 10 7 5,应用接种 30万只犬 ,抗体阳转率为 90 %。     

毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防治技术指南

为了预防、控制和消灭毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎,依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关法律法规,制定毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防治技术指南,指导毛皮动物犬瘟热、细小病毒性肠炎和脑炎防控。     

应用实时荧光定量PCR相对定量法检测毛皮动物细小病毒载量

参考GenBank中已登录的CPV-SC-JM VP2基因序列设计引物,选用β-actin作为内参基因,利用SYBR GreenⅠ实时定量PCR相对定量法,对规模化毛皮动物场的12份粪便样品和5份血液样品进行检测。常规PCR方法检出14份,检出率82%,荧光定量PCR相对定量方法检出17份,检出率100%;粪便中病毒含量明显高于血液中病毒含量,最高可达7000倍;不同毛皮动物粪便样品中病毒含量也存在较大差异。     

水貂部分Toll样受体(TLRs)基因的分子克隆、序列分析及组织表达分析

试验旨在研究Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)在水貂抗病毒免疫中的作用机制,并为抗病育种积累可供选择的基因素材。本试验以雪貂TLRs基因为参考序列设计4对引物对水貂TLR4、TLR6、TLR7及TLR8进行分子克隆,并对所得序列进行生物信息学分析,进一步利用半定量RT-PCR技术分析TLR4和TLR7基因mRNA在不同年龄水貂各组织中的表达情况。结果表明,水貂TLRs与食肉目动物(雪貂、北极熊、大熊猫、海象、海豹、犬、老虎和猫)具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近;组织表达分析表明TLR4和TLR7在检测的组织中广泛表达且表达量存在差异,相比成年水貂,仔貂各组织中TLR4或TLR7基因表达量更高。