34例母黄牛生殖器官的形态观察

<正> 为进一步了解母黄牛病理、生理状态下的生殖器官的形态结构,为教学、临床疾病诊疗和繁殖提供基础资料,1987年2～5月,笔者对34例淘汰母黄牛生殖器官进行了形态学观察,现报告如下:     

人工诱发鸡新城疫的攻毒条件的比较研究

将4周龄淮南麻黄鸡80羽随机平均分成4组：口鼻接种组、皮下接种组、肌肉接种组和空白对照组，分别用不同稀释度的NDV攻毒，观察攻毒结果并统计死亡情况。结果不同攻毒途径的致病性有差异，肌肉注射致病性最强，皮下注射次之，滴鼻滴口最弱。不同攻毒途径所需的攻毒剂量各不相同，滴鼻滴口所需的剂量最大，皮下注射次之，肌肉注射量最小。本文对造成不同攻毒途径致病性差异的原因进行了深入探讨。人工诱发新城疫，建议采用注射途径。     

2018年安徽省部分地区A型禽流感流行率横断面研究

为了解安徽省A型禽流感病毒感染情况,2018年4—5月,在安徽省北部、中部和南部7个市,随机选取各类型场点173个,在每个场点内随机采集35份咽喉/泄殖腔和环境拭子样品,使用荧光RT-PCR进行A型、H5亚型、H7亚型流感病毒核酸检测。结果显示：在4个养殖场、3个活禽批发市场和17个农贸市场检出了A型禽流感病毒,场点阳性率分别为2.9%（4/140）、75.0%（3/4）、80.9%（17/21）,未检出H5和H7亚型流感病毒核酸;A型禽流感群体流行率为11.2%（95%CI：6.5%~15.8%）,个体流行率为1.2%（95%CI：0.9%~1.5%）;活禽交易市场内,禽群感染A型禽流感病毒的风险较高（OR=136,95%CI：32.7~549.4）。结果表明,A型禽流感病毒在养殖和交易环节存在一定的污染,而在活禽交易市场的污染更严重,是今后禽流感防控的重点,需继续加强活禽交易市场的管理和消毒灭源工作。     

应用液态悬浮芯片技术建立17种大肠杆菌耐药基因多重快速检测方法

为建立一种快速、高通量的多重耐药基因检测方法,利用Luminex液态芯片平台,建立了可同时检测17种耐药基因的液态芯片检测方法。该方法对大肠杆菌常见的七大类抗菌药物所对应的17种耐药基因（blaSHV、blaCMY-1、Aph3-IIa-1、aac(6)-Ib-cr、aadA-1、cmlA-1、gyrA、mcr-1、NDM-1、parC、qnrS-1、sul-1、sul-2、sul-3、tetA、tetB、tetX）进行序列分析,随后依次对其设计多重PCR特异性引物,构建特异的阳性质粒作为阳性参比品进行液态芯片检测条件优化,从而进行多重耐药基因液态芯片检测方法的研发。结果显示：成功构建了17种耐药基因的阳性质粒,并建立了两套体系用于检测17种耐药基因。在特异性试验中,两套体系中的检测信号无干扰,具有较高的特异性数值;敏感性试验中,体系一的单一质粒最低检测量为102~104 copies/μL,混合质粒为103~105 copies/μL;体系二的单一质粒最低检测量为102~105 copies/μL,混合质粒为104~106 copies/μL;有效性试验中,液态芯片法与PCR检测结果的Kappa值多在0.60以上,具有高度一致性。结果表明,本研究建立的2套液态芯片检测体系具有高通量、高灵敏和高特异性的优点,可同时对17种耐药基因进行检测,能够达到快速检测的目的。     

脂质体介导马立克病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞

利用粗提的马立克病病毒(MDV)CVI988感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA与脂质体包裹转染CEF,获得具有感染性的MDV。结果表明,使用3μg MDV感染的CEF总DNA转染CEF,6 d~7 d后可形成0~16个MDV特有空斑。     

内毒素对仔鸡血浆SOD活性及MDA水平的影响

为了探讨大肠埃希菌O55∶B5的内毒素(LPS)对仔鸡的损伤机理,将168只仔鸡随机分成4组(n=42),即对照组,100 mg/kgLPS组,200 mg/kg LPS组,300 mg/kg LPS组。灌服内毒素后,分别于2,4,8,12,24,48 h和72 h处死鸡(各时间点均为6只),测定血浆SOD活性和MDA浓度。结果表明,与对照组相比,各剂量组鸡血浆SOD活性均明显降低,MDA含量均明显升高(P<0.05)。且各剂量组之间SOD活性随攻毒剂量的增加而降低,随时间的延长先降低后升高;MDA含量随攻毒剂量的增加而升高,随时间的延长先升高后降低。表明一定量内毒素能诱发鸡体内氧自由基的产生,显著降低机体中SOD的活性和提高MDA的含量。     

稳定表达禽β防御素2的DF-1细胞系的建立及其抗大肠杆菌活性

旨在建立一株稳定表达禽β防御素2(AvBD2)的细胞系,并检测细胞系分泌产物对耐药菌株的抑制效果.首先,根据同源重组设计方法设计一组含有同源臂的AvBD2基因扩增引物及载体反向扩增引物,将片段连接至pLOV-eGFP真核表达载体,构建真核重组质粒pLOV-eGFP-AvBD2,利用三质粒表达系统将重组质粒与慢病毒包装质...     

一株滑液囊支原体的分离鉴定及其磷酸丙糖异构酶（Tpi）和丙酮酸激酶（PK）抗体制备

磷酸丙糖异构酶(Tpi)和丙酮酸激酶(PK)是滑液囊支原体(MS)进行糖酵解的关键酶,牛支原体和鸡毒支原体的Tpi(tpiA基因编码)和PK(pyk基因编码)位于细胞膜和细胞质上,参与对宿主细胞的粘附,而MS的tpiA和pyk分别编码Tpi和Pyk,目前尚未见相关研究。本研究首先对临床分离的MS分离株的生长特性进行研究,然后使用OverlapPCR对tpiA和pyk进行点突变扩增,分别将其克隆至pET-28a载体并在BL21(DE3)中表达,用获得的TpiA和Pyk蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果表明：分离的MS分离株(MS-SD2020)最高生长滴定为10⁹,在生长60 h时达到最高滴定;对tpiA和pyk的序列进行分析表明,其在不同MS中高度保守,并成功表达大小分别为35.28和63.36 kDa的TpiA和Pyk重组蛋白,免疫后制备的兔多克隆抗体效价分别为32 000和2 048 000,本研究为后续开展MS的TpiA和Pyk功能研究提供参考。     

组氨酸激酶基因envZ调控禽致病性大肠埃希菌生物被膜的机制研究

目的 研究双组分系统ompR/envZ中的组氨酸激酶基因envZ对禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)生物被膜形成能力的影响,了解该双组分系统在APEC中对生物被膜的调控机制,为探索生物被膜影响禽致病性大埃希菌耐药性的途径提供参考。方法 采用Red同源重组的方法构建envZ基因缺失株,比较野生株和envZ基因缺失株生长特性、生物被膜形成能力的差异。利用转录组学方法分析envZ在转录调控网络中对其生物被膜形成相关基因的调控机制。结果 成功构建envZ基因缺失株AE17ΔenvZ;envZ基因缺失对APEC的生长速度无明显影响,但使APEC生物被膜的成膜能力减弱。与野生株AE17相比,envZ基因缺失株有711个基因发生差异表达,与生物被膜形成相关的基因显著下调。结论 envZ基因除了响应环境渗透压,还参与调控APEC生物被膜的形成。     

APEC感染雏鸡小肠炎症相关基因的RNA-Seq分析

【目的】研究禽致病性大肠杆菌(APEC)感染雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【方法】对14日龄雏鸡腿部肌肉注射0.5mL/羽1×106 CFU/mL的APEC菌液,观察雏鸡的发病情况,并取病变严重雏鸡空肠为测序样品,同时以注射等量生理盐水为对照,采用RNA高通量测序(RNA-Seq)技术,筛选分析感染和未感染APEC雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【结果】以差异倍数在2倍及以上为标准,从试验组与对照组共筛选出差异表达基因131个。GO分类结果显示,有87个差异基因得到491个GO功能注释,这些基因主要富集在炎症反应、肝素整合、白细胞介素-6的生物合成等过程。基于KEGG分析,仅有29个差异基因得到注释,涉及41个信号通路,主要参与的信号通路有PPAR、花生四烯酸代谢、MAPK等。【结论】APEC感染雏鸡后会引起机体炎症相关基因表达的变化,从中筛选出10个可能在炎症反应中具有重要影响的炎症相关基因。