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【目的】合成、克隆HIV单克降抗体VRC01的单链抗体基因,在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。【方法】根据GenBank上公布的VRC01抗体可变区的氨基酸序列合成引物,运用基因从头合成和重叠延伸PCR方法,克隆抗体VRC01的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因;用15肽Linker(Gly4Ser)3将VH和VL基因相连,得到单链抗体基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,并分别将两者克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒后转入大肠杆菌BL21(DE3+)中诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;将重组蛋白进行变性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达产物进行初步纯化。【结果】得到了VRC01的2种单链抗体的基因scFv-VH-Linker-VL和scFv-VL-Linker-VH,其大小分别为770和768bp。SDS-PAGE电泳结果显示,scFv-VH-Linker-VL在大肠杆菌中不表达或表达量极低;而scFv-VL-Linker-VH表达量较高,蛋白质分子质量约为29ku,且主要以包涵体形式存在。Western blot检测结果证实,scFv-VL-Linker-VH可与His-Tag融合表达,并通过亲和层析法成功纯化获得了该单链抗体。【结论】成功构建、表达并纯化出了VRC01单链抗体,为进一步研究VRC01单链抗体的生物学特性奠定了基础。 相似文献
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1光秃无刺菇 1.1症状表现.菇体呈簇状分枝,个肥大,表面皱缩粗糙,无刺毛,肉质松脆,略黄色或褐色,香味正常. 1.2发生原因.主要是温度偏高,湿度偏低,常在25℃情况下子实体蒸发量过大,而湿度又没及时跟上,就不长刺毛则形成光秃菇. 相似文献
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维生素抗冷应激的作用机制 总被引:1,自引:1,他引:0
在寒冷气候条件下,动物容易产生冷应激反应,导致其生产性能、繁殖性能、饲料消化率、免疫功能及抗氧化功能等下降,增加饲养成本,降低养殖业的经济效益。维生素具有免疫促进与抗氧化作用,能提高动物的免疫功能与抗氧化功能,调节动物自身的防御机能,改善冷应激下动物的抗氧化功能及肉品质量,提高抗应激能力,减轻冷应激的危害,使动物处于良好的生理状态,发挥最大的生产潜能。 相似文献
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重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因.经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204 bp,编码68个氨基酸残基.根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树.发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%.将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达.SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32 ku.对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定.结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性.重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL~250 μg/mL.此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性. 相似文献
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鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析 总被引:1,自引:1,他引:1
【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195 bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32 kD),对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25~125 μg?ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400 μg?ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20~100℃或pH 3~12条件下处理30 min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。 相似文献
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特早熟桃新品种“早龙霞”(暂定名 )是我县龙岗镇孙家庄村 1990年从引进的春蕾桃苗中发现的优良变异单株 ,其生长势和叶变期异于春蕾 ,结果后 ,两者果实性状差别很大 ,综合品质明显优于春蕾 ,经过三代改接观察 ,其优良性状表现稳定。现将其主要特点介绍如下 :1 生长习性早龙霞树势较强 ,树姿半开张 ,萌芽率高 ,成枝力强 ,枝条直立度强于春蕾 ,新梢中部叶片平均长 16 .5cm ,宽 4.3cm ,节间距 1.85cm。 7月中旬部分叶片由绿色开始变为红绿色以至深红色 ,即叶变期早于春蕾 2 0天左右。副梢抽生强 ,长、中、短枝均易成花 ,花粉量大 ,自花… 相似文献