金黄色葡萄球菌CP8-ClfA-FnBPB偶联物的制备及其免疫学特性

以己二酰肼为间桥,碳二亚胺为偶联剂,将纯化的血清8型荚膜多糖和纯化的ClfA-FnBPB融合蛋白偶联制备偶联物,并在偶联的过程中确定其最佳质量比和偶联比.用制备的偶联物免疫小鼠,同时用间接ELISA法检测抗体水平,并对三免后2周的小鼠进行攻毒保护试验.结果显示,用化学方法制备的多糖-蛋白偶联物在其质量比为1:2时可成功偶联,计算得到偶联比为1:1.89.采用间接ELISA法检测抗体水平,二免后7d,偶联物免疫组可产生抗体,且抗体效价最高可达1∶6 400.阴性对照组和单独多糖组均没有抗体产生,而单独融合蛋白组在二免后产生了抗体反应,但抗体效价较低,最高时仅为1∶100.对小鼠进行攻毒保护的结果表明,偶联物组的攻毒保护率最高,可达80％,而阴性对照组、单独多糖组以及单独融合蛋白组的保护率分别为20％、30％和60％.     

牛种与非牛种布鲁氏菌ELISA鉴别检测方法的建立

为建立鉴别不同种布鲁氏菌的ELISA检测方法，筛选出牛种和非牛种布鲁氏菌差异基因NC-017250,并将其克隆至原核表达载体pET-30a中，并诱导表达。以纯化的NC-017250重组蛋白为包被抗原，通过优化反应条件建立NC-017250重组蛋白的间接ELISA检测方法。结果优化后最适血清稀释度为1∶100,兔抗牛HRP-IgG酶标二抗的最佳稀释度1∶5 000,阴、阳性临界值为0.390。用该方法对布鲁氏菌S2免疫血清、A19免疫血清、PPD、FMD、BVD及IBR等阳性血清样品进行检测，除了布鲁氏菌S2免疫血清检出阳性外，其他均为阴性，特异性良好；该方法检测S2和A19免疫血清，并用SPSS软件分析敏感性达95.2%,敏感性较高。重复性试验结果显示，批内变异系数和批间变异系数均<5%。用该方法检测80份牛源临床布鲁氏菌血清样品，结果阳性率为21.3%(17/80)。建立的ELISA方法可用于区分牛种和非牛种布鲁氏菌抗体，为布鲁氏菌不同种鉴定试剂盒的研发奠定了基础。