从植物种子中快速获取高质量DNA的方法(英文)

[目的]该研究旨在寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法。[方法]将种子打磨成粉,取100mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。[结果]从100mg7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。[结论]该方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。     

对绿色食品质量状况的评价及建议

对农业部食品检测中心五年来所进行的川，陕，云，贵藏蒙等省区２３９例“绿色食品”的检验结果统计分析表明，“绿色食品”基本保持了安全，无污染的质量特征，但“绿色食品”仍然存在质量问题，尤其是深加工食品质量的稳定性不及初级农产品。为此，笔者提出应加强标准体系建设，生产基地建设，生产质量管理和监督检验等方面的工作，以稳定和提高“绿色食品”质量的建议。     

无标记基因抗虫水稻外源基因向常规栽培水稻漂移研究

本试验以抗虫转基因水稻华恢1号为研究对象,将几种非转基因常规栽培水稻种植在其周围,按不同距离收集F1代非转基因水稻种子.采用PCR技术对各点收集的水稻种子进行转基因杂种鉴定,统计并分析抗虫转基因水稻中外源基因向非转基因常规栽培水稻漂移的频率.结果表明:外源Bt基因向P13381和春江063水稻平均漂移频率皆为零.而抗虫转基因水稻华恢1号与非转基因水稻合系22-2、天香、明恢63、P1157几个品种不同程度地发生了转基因漂移,平均漂移频率最高为0.875％,并且漂移频率随着距离加大而逐渐降低,而在7m以外的所有采样点平均转基因漂移频率为零.该研究表明抗虫水稻华恢1号外源基因的基因漂移频率非常低,其对生态环境的潜在风险很小,通过田间合理布局进行物理隔离,保持合适距离,以及科学安排农时,错开花期等方式,能有效控制转基因水稻外源基因漂移和降低因转基因逃逸带来生态风险.     

两种蛋白质变性剂在转基因成分检测中的抑制作用

本文以抗除草剂(EPSPS)转基因大豆GTS-40-3-2为材料,在Lectin基因的扩增体系中设置了不同浓度的十二烷基硫代硫酸钠(SDS)和酚,探讨了SDS和酚这两种蛋白质变性剂在转基因成分检测中的抑制作用.结果表明,在反应体系中SDS的浓度大于或等于4.8×10-4 g/mL时,能完全抑制PCR反应;酚的体积比大于或等于8.0×10-3 时,体系中的DNA聚合酶全部变性,PCR反应彻底被抑制.     

GTS40-3-2大豆转化体特异性的定性PCR检测

为了建立转基因大豆GTS40-3-2转化体特异性定性PCR检测方法,本研究根据已公布的转基因大豆GTS40-3-2的旁侧序列信息,用Primer 5.0软件在左右边界的结合位点处设计了5对引物组合,选取扩增片段为370 bp最佳引物组合后,优化了反应体系中引物浓度和退火温度.以Lectin为内标基因,验证检测引物的特异性及灵敏度,建立了转基因大豆GTS40-3-2转化体特异性定性PCR检测方法.结果表明,该方法成本低、效率高,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点,已通过全国六家实验室的循环验证,能特异地检测大豆样品中GTS40-3-2转化体,最低限可达0.05％.研究表明,该方法满足我国转基因生物安全管理过程中对GTS40-3-2大豆的检测需求,具有良好的应用前景.     

转基因产品检测中标准的使用——以MON810为例

转基因成分检测是转基因产品身份确定的主要手段,目前我国转基因成分检测标准体系有国标、行标以及地标3类,标准覆盖数十种检测参数和上千的动植物源性产品。本文以转基因玉米MON810品系检测为例,从目前转基因产品检测标准的适用范围、技术特点等角度讨论了在转基因产品检测过程标准的使用及其注意事项,为常规的转基因产品检测提供参考和指导。     

转基因玉米MON863结构特异定量PCR方法的建立

根据转基因玉米MON863载体构建特异结构,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米MON863载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法定量检测了1％含量的MON863标准品(不确定度为10％).结果显示,采用本文构建的方法获得标准曲线斜率,在-3.6～ -3.1之间,相关系数大于0.99,扩增效率为105.436％,在90％～110％的范围内.待检样品的定量检测结果(1.08％)非常接近真实值(1％,不确定度为10％),表明本文建立的转基因玉米MON863结构特异定量PCR检测重复性好,灵敏度和准确度高,可以在日常检验中推广应用.     

成都市场大豆酱油rDNA成分分析

利用深加工产品DNA抽提试剂盒和PCR定性检测方法,对成都市场上的大豆酱油进行了外源基因片段检测。结果表明:在成都市场上随机抽样的7种大豆酱油样品未检出EPSPS基因成分。     

从干种子中快速获取高质量DNA的高盐提取方法

为寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法进行本研究。将种子打磨成粉,取100 mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。从100 mg 7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21 ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。结果表明本方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。