土霉素对土壤微生物活性及群落的影响

采集小麦根际土壤,加入不同量的土霉素药物,使药物浓度为0、10、30、50、70mg·kg-1.利用平板菌落计数法.对不同浓度土霉素作用于根际土壤后两大类微生物(细菌、放线菌)数量进行了研究,探讨土霉素对小麦根际土壤微生物数量及活性的影响.结果表明,土壤微生物数目较原始土样有了较大的变化.细菌数目随药物浓度的增大数目整体呈减少趋势,在10mg·kg-1、30mg·kg-1土霉素条件下有较明显的减少,50mg·kg-1时略有上升,后继续减少;放线菌数目整体呈上升趋势.在不同土霉素浓度的作用下,碱性磷酸酶活性明显降低,对脱氢酶略有影响,对脲酶影响不大,其中碱性土壤中碱性磷酸酶活性比酸性土壤高.但随着培养时间的增长,各种酶活又逐渐恢复.     

LBD家族转录因子TtRa2和AtLBD37的表达与纯化

【目的】由于LBD基因编码一类植物特有的空间结构尚未解析的转录因子,拟建立2种LBD家族成员(TtRa2和AtLBD37)及其DNA结合结构域的高效表达与纯化体系,为该家族转录因子的结晶研究奠定基础。【方法】以pET-21a表达载体为基架,设计并构建了pHMT载体,该载体在目标基因上游依次融合了His-tag、MBP和TEV蛋白酶酶切位点。将TtRa2和AtLBD37基因的完整编码区及其DNA结合结构域编码区分别插入pHMT载体,获得重组质粒pHMT-AtLBD37、pHMT-AtLBD37-BD、pHMT-TtRa2、pHMT-TtRa2-BD。将上述质粒导入E.coli表达菌株2566诱导表达,先使用amylose亲和柱纯化获得融合蛋白,再用融合His-tag的TEV蛋白酶切除融合蛋白TtRa2-BD中的His6-MBP双标签,使用Ni-NTA亲和层析柱去除TEV蛋白酶和His6-MBP标签,最后获得目标蛋白。【结果】TtRa2和AtLBD37及其DNA结合结构域均获得了高效可溶性融合表达,其表达量占细胞总蛋白的50%~70%;TtRa2-BD经2步亲和纯化后,每升菌液可获得15mg纯度大于98%的目标蛋白。【结论】成功建立了2种LBD转录因子及其DNA结合结构域的高效表达和纯化体系。