猪链球菌噬菌体SMP末端酶大亚基单位的活性研究

末端酶(terminase)是dsDNA病毒包装过程中的必要功能蛋白,其大亚基单位在包装过程中往往行使全酶的作用,一般具有ATP酶活性和限制性内切酶活性。噬菌体SMP是猪链球菌2型的烈性噬菌体,本研究以SMP基因组为模板,扩增SMP末端酶大亚基单位基因(TlsSMP),构建pEASY-E1-Tls重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对TlsSMP融合蛋白进行活性检测。结果显示,末端酶大亚基单位在大肠杆菌中呈可溶性表达,具有ATP酶生物学活性,在pH7、23℃和Mg2+存在的条件下,其活性最强,其他金属离子如Ca2+、Mn2+和Co2+都对其有不同程度的抑制作用。本研究为进一步研究猪链球菌噬菌体的包装机制奠定基础。     

猪场采集样品和疫苗样品中猪鼻支原体的检测

猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis,Mhr）是引发猪地方性肺炎及仔猪多发性浆膜炎、关节炎的重要病原之一，也会引起猪场的常见消耗性疾病。Mhr常常污染细胞培养物，对疫苗生产造成巨大危害。定期对猪场常用的生物制品进行Mhr检测，可减少猪场由于污染的生物制品而造成损失。     

猪鼻支原体PCR检测方法的建立

猪鼻支原体是猪鼻腔上的常在菌,引起仔猪多发性浆膜炎和关节炎,是猪场一种重要的消耗性疾病。为了对猪场中猪鼻支原体的感染和发病情况进行初步调查,建立一种可靠的PCR检测体系。方法的敏感性需满足检测要求,能与几种常见的导致猪呼吸道和多发性浆膜炎的疾病区分开。     

2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较

体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。