内蒙古某奶牛场两种致犊牛腹泻原虫的鉴定及遗传进化分析

为明确内蒙古某规模化奶牛养殖场腹泻犊牛寄生虫性病原的感染情况及其分子学特性,采集该养殖场18头发生腹泻犊牛的新鲜粪便样品。通过形态学方法并结合分子生物学方法对样品中隐孢子虫(Cryptosporidium)和蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)进行分离鉴定和感染情况统计分析。形态学检查结果表明,18份粪便样品中隐孢子虫感染率为5.56%(1/18),蓝氏贾第虫感染率为72.22%(13/18)。进一步对18份粪便样品提取DNA,并基于SSU rRNA和BG基因位点分别对隐孢子虫和蓝氏贾第虫进行PCR扩增、序列比对和遗传进化分析。电泳检测结果显示,显微镜检测阳性粪便样品均在830 bp和511 bp处出现目的扩增条带。同时,序列比对及遗传进化分析也表明,所分离到的隐孢子虫与来自于不同国家和地区的牛隐孢子虫(C.bovis)在SSU rRNA基因位点上具有100%序列同源性,因此被归于同一个进化分支,而所分离的蓝氏贾第虫在BG基因位点上与集聚体E参考分离株的序列同源性高达99.78%以上,提示其属于集聚体E。通过形态学和分子学方法明确了牛隐孢子虫和蓝氏贾第虫是该奶牛场主要致犊牛腹泻...     

陕西某羊场莎能奶山羊球虫分离鉴定及感染情况

对陕西省某羊场莎能奶山羊的球虫感染情况进行调查研究,应用球虫卵囊富集技术,结合形态学方法对采自该场2～12月龄的49份（≤2月龄22份;3～5月龄13份;6～12月龄14份）奶山羊新鲜粪便样品进行球虫卵囊分离,显微镜检测和OPG（Oocysts per gram）统计。结果显示,莎能奶山羊球虫总感染率为98.0%（48/49）,OPG统计发现,3～5月龄羔羊球虫平均OPG最高,为2 442个/g。最高OPG存在于2月龄羔羊样品中,为15 083个/g,且该羊只出现严重腹泻症状。对富集分离到的球虫卵囊进行孢子化和种类鉴定,共鉴定出7种山羊艾美耳球虫。进一步对随机提取的277个孢子化球虫卵囊进行优势虫种统计分析,其中雅氏艾美耳球虫（Eimeiria ninakohlyakimovae）、阿氏艾美耳球虫（E.arloingi）和柯氏艾美耳球虫（E.christenseni）占比最高,依次为17.3%（48/277）、15.9%（44/277）和15.2%（42/277）,是该羊场莎能奶山羊球虫的优势虫种。综上所述,初步明确该羊场莎能奶山羊不仅普遍存在球虫感染,而且存在多种球虫混合感染和致病力较强的优势虫种。     

一种犬耳痒螨PCR检测方法的建立及应用

为了能从犬、猫耳垢中对犬耳痒螨(Otodectes cynotis)进行特异性检测，基于犬耳痒螨18S-ITS1基因序列设计特异性引物，通过对退火温度等条件进行优化，建立犬耳痒螨特异性PCR检测方法。结果显示，该方法能成功从犬耳痒螨DNA样本中扩增出352 bp的特异性条带，特异性良好；其最低检测DNA浓度为0.897 fg/μL,敏感性较高。用所建立的PCR检测方法对78只犬、猫的耳垢样本进行检测，犬耳痒螨的阳性率为66.7%,高于显微镜检测结果(阳性率为62.8%);对52份经PCR方法检测的犬耳痒螨阳性样本进行种群结构分析，未发现犬耳痒螨rDNA ITS1序列的遗传变异出现地理差异和宿主特异情况。结果表明，建立的PCR方法能够应用于临床检测犬、猫耳垢样本中的犬耳痒螨，为犬、猫耳螨病的诊断提供了一种辅助方法。     

山羊源3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫雌虫的多位点序列分析

旨在解析3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）的遗传进化差异，本研究从养殖场山羊皱胃中分离到捻转血矛线虫虫体，采用普通光学显微镜观察71条雌虫虫体阴门盖的形态结构特征，并基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因位点，采用PCR法对不同阴门盖的虫体进行扩增，通过比对多位点序列进行遗传进化分析。经显微镜观察发现，本研究分离到的捻转血矛线虫雌虫阴门盖存在舌瓣形、亚球形和舌-球混合形3种形态，所占比例分别为45.07%（32/71）、50.70%（36/71）和4.23%（3/71）。对43条雌虫全长和阴门至虫体末端长度进行测量和统计分析，结果显示，3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫全长统计学差异不显著（P>0.05），而3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫阴门至虫体末端的长度存在显著性差异（P<0.05）。基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因进行的序列分析结果显示，不同形态阴门盖虫体的9个样品在3个基因位点上存在不同程度的碱基差异，多态性位点分别为10、13和43个，核苷酸多态性分别为0.85%、1.34%和1.97%。基于ITS-1和ITS-2构建的遗传进化树显示，研究中所用样品与GenBank上H.contortus的参考序列处于同一进化支，表明本研究所分离到的虫体均属捻转血矛线虫。捻转血矛线虫雌虫的阴门盖存在形态学差异，不同形态阴门盖虫体在ITS-1、ITS-2和nad4基因位点上均存在不同程度的碱基差异，此研究结果为捻转血矛线虫的种类鉴定和遗传进化提供了参考数据。