羊IL-1Ra基因全长cDNA克隆及生物信息学分析

试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子（interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列（GenBank登录号：KC425613.1）设计引物，利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因，对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明，羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp，可编码174个氨基酸，含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域（PHA02651结构域）。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u，等电点（pI）为5.72，其分子式为C₈₈₅H₁₃₈₅N₂₃₅O₂₅₆S₁₁，且含有信号肽。二级结构分析显示，IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点，与三级结构预测结果一致，且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高，达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构，其酶结合结构域位于TYR⁴⁷至GLU⁶⁶之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对，发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现，羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。     

鲍曼不动杆菌雏鸡分离株CCGGD201101的分离、鉴定及致病性研究简

试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16S rDNA测序鉴定，并人工接种昆明鼠，测定其半数致死量，验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象，并以鲍曼不动杆菌标准株（ATCC 19606）为对照，测得半数致死量，进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。     

A型肉毒毒素重链C片段基因的克隆及序列分析

成功克隆了A型肉毒毒素重链C片段部分基因．以肉毒梭菌(62A)基因组DNA为模板，以此基因特异性引物为介导，采用Touchdown PCR方法，从肉毒梭菌基因组中扩增出目的基因片段后，将其克隆入T载体，进行酶切鉴定和序列分析．结果表明，此基因片段与(Genbank中的BoNTa基因(收录号：M30196)核苷酸序列的同源性为100％，说明目的基因得到了成功地克隆，为后续研究奠定了基础．     

几种食药两用真菌的抗疲劳作用研究

为筛选有抗疲劳作用的食药两用真菌,并为其在抗疲劳药物和抗疲劳功能性食品研究中的应用提供实验依据,本实验通过游泳耐力和生化指标的测定对几种食药两用真菌的抗疲劳作用进行了研究。结果表明,灵芝、冬虫夏草、香菇、银耳、猴头均可延长小鼠游泳时间,降低小鼠游泳后血清尿素氮(BUN)和血乳酸含量;灵芝和冬虫夏草还可增强血清乳酸脱氢酶(LDH)活性。根据《保健食品功能学评价程序与方法》中的有关规定,可以认为:上述几种食药两用真菌能增强机体对运动负荷的适应能力,具有抗疲劳功能。     

重组猪链球菌2型溶血素的表达及其溶血活性和致炎作用

PCR扩增溶血素(suilysin, SLY)基因,克隆后测序,利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统,采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况,借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形态学观察显示,质量浓度为0.4 mg/L的SLY在37℃条件下作用2 h可使贴壁hCMEC/D3(人脑微血管内皮细胞)全部死亡。通过分光光度法测定SLY对人红细胞的溶血活性,结果显示1μg SLY可使2.25×10¹⁰个人红细胞完全溶解。Real-time RT-PCR结果显示,SLY处理所致破碎的红细胞上清可使hCMEC/D3细胞炎性因子IL-6和IL-8转录水平分别升高80倍和100倍以上,且该作用效果显著高于超声破碎红细胞的方式。结果表明,SLY具有显著的细胞毒性,其导致红细胞溶血可能是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引起机体炎症反应的原动力。     

抗磺胺二甲嘧啶单链抗体基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR方法成功克隆出抗磺胺二甲嘧啶（SM2）单抗的杂交瘤细胞中396 bp的VH和339 bp的VL可变区基因,再通过重叠延伸PCR方法,由引入的（Gly4Ser）3柔性肽体外组装抗717bp的SM2-ScFv基因。测序经NCBI Blast比较分析和Expasy预测分析。结果表明：所得ScFv具有重组功能性鼠抗体可变区基因的特征,单链抗体的结构符合抗体可变区的功能区的框架区和可变区的结构特点,是抗磺胺二甲嘧啶的可变区基因,且经lingker连接后为影响轻重链的结构。     

抗盐酸克伦特罗单链抗体基因的克隆、序列分析及表达

提取分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA,通过RT-PCR技术,扩增VH和VL,用一段柔性肽链-(G4S)3将VH和VL连接成ScFv。测序后经NCBI Blast分析,所得ScFv具有重组功能性鼠抗体可变区基因的特征。将所得目的基因与pET-22b( )连接,转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析,37℃培养5 h表达量较大,25℃诱导表达以可溶性为主。     

乳品安全现状

随着我国经济的发展、国民生活水平的提高,乳品行业异军突起,成为关系国计民生的朝阳产业。但是随着乳品行业的发展,乳品安全危机事件频频发生,影响十分恶劣,这严重打击了消费者信心,阻碍了行业的发展,造成严重的经济损失。造成乳品安全事件频发的因素很多,本文从生产及监控上进行了总结与阐述。     

石房蛤毒素单克隆抗体的制备及其特性研究

将石房蛤毒素（Saxitoxin,STX）与牛血清白蛋白(BSA)偶联构建完全抗原STX-BSA,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得1株稳定分泌抗STX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚类为IgM。体内诱生法收集腹水单抗,间接ELISA方法测定抗体效价为1∶102400,抗体亲和常数为3.71×106 L/mol。