4株Ⅰ亚群禽腺病毒分离株对SPF雏鸡的致病性研究

【目的】探究Ⅰ亚群禽腺病毒(Fowl adenovirus, FAdV)分离株GDDL-4(FAdV-4)、GDB3-8a(FAdV-8a)、GDT08-8b(FAdV-8b)、GDWYT-11(FAdV-11)对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】设立4个攻毒组(GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11)及对照组,攻毒组选择腿部肌内注射接种0.2 mL 10⁵ TCID₅₀病毒液,对照组接种等体积PBS。接种后观察SPF雏鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化,同时检测其排毒量和病毒载量。【结果】所有攻毒组鸡均表现为精神沉郁、消瘦、扎堆等,病理剖检以严重心包积液-包涵体肝炎综合征病变为主,其中GDDL-4组症状最为严重,死亡率最高达85%,总体死亡率在0～85%之间。排毒分析结果发现,GDDL-4和GDB3-8a组出现高滴度排毒(≥10⁴拷贝/μL),GDT08-8b和GDWYT-11组仅能检测到低滴度(≤10³拷贝/μL)排毒。器官指数表明,除GDT0...     

禽呼肠孤病毒检测方法研究进展

禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)主要引起家禽病毒性关节炎和免疫抑制,进而导致继发感染。近年来,随着ARV及其变异毒株的出现,加之传统疫苗对变异株的保护力不足,且没有特效药物治疗,使我国禽养殖业面临ARV感染的巨大风险。目前禽养殖场主要通过严格的生产管理结合周期性检测对禽呼肠孤病毒病进行防控。因此,本文着重介绍并分析了国内外已报道的ARV检测方法,为ARV的监测及新型诊断技术的研发提供依据,同时也为疫病的防控提供参考。     

广东某地区猪丹毒杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

对广东某地区暴发的疑似患有猪丹毒杆菌的猪,取其肝、肾、脾等组织进行猪丹毒杆菌的分离鉴定,应用16S rRNA通用引物对获得的优势菌株进行基因扩增及序列鉴定,对鉴定的猪丹毒杆菌进行SPF级小鼠攻毒试验;ELISA检测小鼠血清中IgM和IgG的含量,观察肝脏、脾脏的病理变化;药物敏感性试验分析鉴定菌株对青霉素、氨苄西林、链霉素、头孢克肟和头孢噻肟等9种药物的敏感程度。结果表明,经过分离培养及16S rRNA鉴定的细菌有5株为猪丹毒杆菌,小鼠血清中IgM和IgG含量试验组显著大于对照组,感染小鼠肝脏和脾脏细胞均出现不同程度的变性或坏死;药物敏感试验结果显示,获得的5株菌均对林可霉素耐药,对青霉素、氨苄西林和头孢噻肟极度敏感,对头孢氨苄重度敏感,对阿奇霉素、恩诺沙星中度敏感。     

Ⅰ群禽腺病毒多种血清型的Hexon、Fiber基因遗传进化分析

为了进一步丰富和完善广东地区禽腺病毒(Fowl adenovirus, FAdV)的分子流行病学,试验采用PCR及基因克隆测序技术对2014—2020年期间瑞普(天津)生物药业有限公司分离保存的9株Ⅰ群FAdV分离株进行分子生物学鉴定,并通过MEGA 5.1软件对各分离株的Hexon与Fiber进行遗传演化分析。结果表明：9株Ⅰ群FAdV分离株中有5株4型分离株,分别为GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4;2株8型分离株,分别为GDB3-8a和GDT08-8b; 2株11型分离株,分别为GDWYT-11和GDZWJ-11。分离株GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4与FAdV-4型国内参考株GDMZ(GenBank登录号MG856954.1)的同源性为99.9%～100%;分离株GDB3-8a、GDT08-8b与FAdV-8a英国参考株764(GenBank登录号KT862811.1)的同源性为97.1%～97.7%;分离株GDB3-8a、GDT08-8b与FAdV-8b日本参考株TR59(GenBank登录...     

非洲猪瘟病毒I177L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为了制备抗非洲猪瘟病毒I177L蛋白的多克隆抗体，根据HLJ/2018株的I177L序列，设计引物，扩增带有His标签序列的I177L序列，并将其插入pMAL-c5x原核表达载体中，转化至Rosetta(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达和切胶纯化后，用Xa蛋白酶因子去除重组蛋白中的MBP标签。将处理后的I177L蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。结果显示，在37℃、0.6 mmol/L IPTG条件下，诱导5 h后，重组MBP-I177L蛋白表达量最高，蛋白分子质量大小约为67 ku,与预期大小相符；重组蛋白以可溶性表达为主；多克隆抗体经Western blot、间接ELISA及IFA试验结果显示，抗体效价为1∶128 000,并且该抗体能特异性识别I177L蛋白。