牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株E0基因的克隆与抗原表位预测

根据GenBank上发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) Oregon C24V株E0基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增BVDV HB-DCZ株E0基因.将PCR产物克隆到pMD18-T载体,克隆产物进行序列测定与分析.结果显示,HB-DCZ cDNA体外扩增获得特异性条带,约为687 bp.序列测定结果表明,HB-DCZ株E0基因由681个核苷酸组成,编码227个氨基酸.与已公开发表的BVDV其他毒株核苷酸和推导氨基酸序列同源性相似顺序依次为:CCSYD 99％和98.7％、QHZK10 98.4％和97.8％、VEDEVAC 98.2％和97.8％、Oregon C24V80.9％和89.9％、Yak 74.2％和81.1％.HB-DCZ与CCSYD、QHZK10以及VEDEVAC株的遗传距离较近,与国际标准毒株C24V、Yak株的遗传距离较远.运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,采用Karplus-Schulz方案预测蛋白质的柔性区域,按Jameson-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性.对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N-端6～17、23～29、47～53、59～68、70～81、97～109、114～122、127～134、137～143、165～172、186～198和213～220.     

冷应激条件下猪脂肪组织中脂联素及其受体 mRNA水平的表达变化

为了研究冷应激对脂肪代谢的影响,本试验分别在-15~-10 ℃、-10~-5 ℃、-5~0 ℃、15~18 ℃温度条件下采取猪颈部、背部皮下和内脏系膜脂肪组织,通过荧光定量RT-PCR方法检测脂联素及其受体mRNA的表达水平。结果显示,随着冷应激强度的逐渐加大,在颈部、背部皮下、内脏系膜Adiponectin mRNA的表达量逐渐降低,差异显著(P＜0.05);内脏系膜中AdipoR 1和AdipoR 2 mRNA表达量先逐渐升高后恢复正常,且差异极显著(P＜0.01);背部皮下AdipoR 2 mRNA表达量先逐渐降低后恢复正常,差异极显著(P＜0.01),AdipoR 1 mRNA表达量没有明显变化;颈部皮下AdipoR 2 mRNA的表达量先逐渐升高后恢复正常,差异极显著(P＜0.01),AdipoR 1 mRNA的表达量先升高后恢复正常,而后又升高,差异极显著(P＜0.01)。结果表明,脂联素及其受体参与冷应激过程,它们可能与冷应激条件下脂肪组织的重新分布有重要的关系。     

清髓愈疽丹对血栓闭塞性脉管炎模型大鼠血栓相关因子的影响

通过人工建立血栓闭塞性脉管炎大鼠模型，结合病理学切片结果，利用荧光定量PCR和ELISA方法检测病变组织中的Icam-1、Vcam-1和血清中的血栓素B2（TXB2）、抗内皮细胞抗体（AECA）的含量。结果表明清髓愈疽丹能够通过有效地降低Icam-1、Vcam—1、TXB2、AECA的含量，抑制淋巴细胞、白细胞的浸润和血小板的黏附聚集，阻止血液高凝状态的形成；延缓损伤内皮处免疫复合物的形成，从而减轻痛变部位的炎症与损伤，因此能抑制血栓的形成，对TAO有确实的疗效。     

不同马传染性贫血病毒株编码的S2蛋白拮抗SERINC5分子机理的研究

为研究不同马传染性贫血病毒(EIAV)编码的S2蛋白拮抗宿主限制因子丝氨酸整合蛋白5(Ser5)的机制,本研究利用HIV-1野生型(WT)和HIV-1 △Nef前病毒质粒包装两种HIV-1假病毒,通过测定细胞上清中病毒粒子含量和靶细胞中荧光素酶活性检测病毒相对感染性,分析pSPEIAV19编码的S2蛋白(S2)和中国E...     

西藏曲松县生态环境现状评价

对西藏自治区曲松县生态环境现状进行了评价。结果表明,区内生态环境既有有利的方面,如水热同期、光温配合好,降水相对较多,生态系统复杂多样等;也有不利方面,表现在土壤多具有原始性和幼年性特征,气候灾害和山地灾害类型多,发生频繁,植被退化严重,群落物种的多样性小,群落稳定性差,生态系统脆弱等方面。全区可划分为3个生态小区,各生态小区具有不同的适宜性和限制性。     

β-羟丁酸抑制下丘脑神经细胞PIF基因表达和蛋白分泌

分离培养Wistar新生大鼠的下丘脑神经细胞,在培养第7天以不同浓度的β-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHBA）（0、0.05、0.5、1、2mmol/L）处理24h,收集上清和细胞,提取细胞总RNA,分别利用荧光定量RT-PCR和ELISA的方法检测催乳素释放抑制因子（Prolactin release-inhibiting factor,PIF）基因表达和蛋白分泌的变化。结果显示,BHBA能显著抑制PIF基因表达和蛋白分泌,而且具有剂量依赖性。结果表明,BHBA可能做为信号分子调节下丘脑的分泌功能。     

IL-21及其受体在IBD大鼠结肠、大脑组织中的表达规律

从脑-肠互作的角度出发，研究IL-21及其受体在TNBS化学诱导的IBD模型大鼠的结肠、大脑组织中mR—NA表达水平以及血清蛋白水平变化，以此探讨IL-21在炎症性肠病中的调节作用。建立了大鼠IBD模型，用荧光定量PCR方法检测IL-21及其受体mRNA在结肠、大脑组织中的表达水平变化，并采用ELISA方法测定血清中IL-21在IBD大鼠不同发病时期的蛋白水平。结果显示：IL-21及其受体在IBD大鼠结肠和大脑组织中的mRNA水平的呈现一致变化，即随着炎症的加剧而逐渐增加，在痛变最为严重的时候达到最大值，而随着炎症的消退逐渐恢复至正常水平。在血清中，IL-21蛋白浓度变化也表现出一致的变化趋势。结果表明，IL-21参与了肠道炎症进程，并且IL-21可能通过脑一肠互作来调节IBD的炎症进程。     

冷应激对猪脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织中PPARγ2 mRNA及蛋白表达的影响

为了研究冷应激对机体的影响及过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）在冷应激中的作用,本试验选用30头军牧一号猪,并随机分成5组,包括常温对照组和4个冷应激组。常温组在（21±2）℃饲养,冷应激组的温度设置分别为：（-10±2）、（-5±2）、（0±2）、（5±2）℃。冷应激2h屠宰后分别采集猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织样品提取总RNA与总蛋白。通过荧光定量PCR技术检测了PPARγ2mR-NA的表达量;通过Western blot检测PPARγ2蛋白表达量。结果显示,各温度组猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏PPARγ2mRNA及蛋白表达量总体上差异显著（P〈0.01）,肾脏PPARγ2mRNA表达量总体显著升高,但其蛋白表达量总体呈下降趋势。结果表明,PPARγ2对冷刺激非常敏感,它除了可以调节冷应激时的脂肪代谢平衡,还对心脏有较好的保护作用,但是对肾脏的作用有限。本试验显示了冷应激中PPARγ2在脂肪代谢与能量代谢中作用,为研究冷应激对机体的影响及畜禽品质的提高奠定了基础。     

南柴胡质量标准提升研究

本研究为完善南柴胡质量标准提供参考。对南柴胡进行实地采样,其中10批为栽培品,2批为野生品,通过基原鉴定、性状观察、检查和浸出物测定进行真伪优劣评价;建立显微鉴定、薄层色谱鉴别和含量测定,对采收期进行考察。结果显示,12批南柴胡为狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium)的干燥根,性状特征、水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物测定结果符合《中国药典》(2020版)标准;新增加显微鉴别项,建立了薄层色谱鉴别方法,柴胡皂苷a(SSa)、柴胡皂苷c(SSc)和柴胡皂苷d(SSd)斑点清晰,分离度好,可用于南柴胡的专属性鉴定;建立了HPLC测定方法,SSa和SSd总量为0.02%～0.10%;以SSa和SSd含量为指标,参考根重,确定9月份为南柴胡适宜采收期。本研究完善了南柴胡药材的质量标准,为合理评价质量积累了必要的基础依据。     

宿主细胞弗林蛋白酶对SARS-CoV-2刺突蛋白切割作用的研究

严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) S蛋白与宿主表面受体ACE2结合后，S蛋白中的Furin裂解位点RRAR被宿主细胞内的弗林蛋白酶(Furin)识别，并将S蛋白切割为S1/S2亚基。为研究Furin对SARS-CoV-2S蛋白的切割活性、对病毒的感染性及其形成细胞-细胞膜融合(合胞体)的影响，本研究采用套式PCR分别扩增S蛋白Furin裂解位点突变(将裂解位点由RRAR分别突变为RRRR、SRAS和AAAA)的编码基因片段，并分别克隆至pCAGGS载体中，构建重组质粒pRRRR-Flag、 pSRAS-Flag、 pAAAA-Flag，均经酶切和测序鉴定正确后构建pEGFP-RRRR、pEGFP-SRAS、pEGFP-AAAA质粒并经测序鉴定。采用慢病毒包装系统包装慢病毒后感染Huh7细胞，48 h后采用杀稻瘟菌素筛选共表达ACE2和TMPRSS2的Huh7细胞系Huh7-A+T；利用CRISPR-Cas9方法构建Furin敲除(Furin-KO)细胞系，并均经western blot鉴定。结果显示，上述两种细胞均正确构建。将与Flag融合表达的RRAR、 RRR...