侧耳RSAP-PCR体系的建立和优化

采用单因素试验和正交设计相结合进行了侧耳(Pleurotus ostreatus)RSAP-PCR反应体系的建立和优化,并对优化后体系的稳定性进行了验证.讨论了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq聚合酶用量和模板DNA含量对侧耳RSAP-PCR反应的影响,最终得出总体积为25μL的反应体系:30 ng模板DNA,2.0 μL 10倍PCR buffer,Mg2+ 2.5 mmol/L,dNTPs o.25 mmol/L,引物0.32 μmol/L,Taq DNA聚合酶2U,ddH2O 13.2 μL.