末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)在微生物群体分析上的应用与技术优化

末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)是以荧光标记引物PCR为基础,根据末端限制性片段长度区分出微生物群体组成的一种微生物群体图谱法。本文综述了该方法在群体微生物分析上的应用及DNA提取、PCR扩增、酶切和数据分析等步骤的技巧与优化,总结了科学应用该技术的要求以及和多重PCR、gyrB基因等相结合的观点。     

苜蓿青贮过程中乳酸菌复合系Al2的接种效果及菌群的追踪

以苜蓿(Medicago sativa)为原材料，添加乳酸菌复合系Al2调制青贮苜蓿，并以不添加接种剂的苜蓿作为对照，分析苜蓿青贮过程中微生物区系变化及接菌的改善效果。通过提取青贮料中细菌的总DNA，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其16S rDNA V3区域，利用变性梯度凝胶电泳法(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis, DGGE)分析青贮料中细菌的区系变化，并结合平板计数法对青贮料中的乳酸菌、一般细菌、霉菌进行动态分析。DGGE图谱结果显示自然青贮苜蓿的优势菌是戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。在接菌Al2的青贮料中，以植物乳杆菌(Lactabacillus plantarum)为主的Al2的成员菌迅速控制发酵过程，并且在发酵过程中稳定存在。与对照相比，添加乳酸菌剂能够提高乳酸菌的数量，在第2 d将青贮料的pH值降低到4.2，最后稳定到4.1，显著提高了乳酸生成量，降低了氨态氮的产生，明显改善了青贮饲料的发酵品质。