广东鸽禽Ⅰ型副黏病毒基因Ⅶ型的分离鉴定

2007年在广东某发病鸽群中分离到一株鸽禽Ⅰ型副黏病毒（GM01）．经测定,其鸡胚平均死亡时间（MDT）为76h,鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1．3,在鸡和鸡胚上为中等毒力病毒。应用RT—PCR对F基因片段进行扩增并测序,结果表明该F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112R—R—Q—K—R—F 117,是典型的强毒株序列。用DNASTAR软件对GM01株F基因片段与国内外相关的NDV参考株进行比较,结果表明GM01株与Chicken／Gx／14／2005株的核苷酸和氨基酸相似性分别为98．6％和98．4％;与Pigeon-Gxp40毒株核苷酸和氨基酸相似性分别为98．5％和98．7％,在遗传进化树中位于同一个分支,同属于基因Ⅶ型;与国内代表性弱毒疫苗株LaSota毒株和NDV强毒株F48E9的核苷酸及氨基酸相似性分别为84．1％和86．5％及86．3％和88．0％。     

黏膜免疫在疫苗中的应用

黏膜免疫系统是动物机体免疫系统中的重要组成部分,主要包括肠道黏膜免疫和呼吸道黏膜免疫。近年来随着畜牧业快速发展,传统疫苗免疫方式弊端愈发明显,黏膜免疫方式在疫苗接种中应用越来越广泛,本文阐述了黏膜免疫在猪用疫苗和禽用疫苗上的应用,并提出影响黏膜免疫的因素及未来黏膜免疫和中兽药配合应用的发展前景。     

广东部分地区鸽禽Ⅰ型副黏病毒分子流行病学研究

为了解广东近年来鸽禽Ⅰ型副黏病毒(PA/PMV-Ⅰ)基因变异情况,为新型疫苗毒株的筛选以及PA/PMV-Ⅰ的免疫防制提供依据,我们对广东不同地区在1999年～2007年发生PA/PMV-Ⅰ鸽群开展流行病学调查、病原分离鉴定,从中筛选出8株病毒进行F基因RT-PCR扩增、测序和相似性分析.结果表明,8株PA/PMV-Ⅰ之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为83.7%～99.9%和87.9%～99.6%,其中P199902-1株和P200201-1株之间的氨基酸相似性最高达99.6%,与其他6株的氨基酸相似性则相对较远.遗传进化树分析结果表明,P199902-1、P200201-1、P200301-5、P200401-3株和P200705-1株属于基因Ⅵ型;P200001-2株属于基因Ⅱ型,与疫苗株LaSota-46株亲缘关系较近;P200103-5与P200603-5株属于基因Ⅶ型与国内广西等地的鸡源NDV流行株Chicken/Gx/14/2005和NDV0210149株亲缘关系最近.     

鸵鸟新城疫免疫程序的制定及现场应用试验

本文通过对鸵鸟新城疫病毒母源抗体及疫苗免疫后抗体消长动态的检测，制定出了鸵鸟新城疫的免疫程序：首免：21日龄，新城疫病毒灭活疫苗，0．5—1．0mL／只，肌注；二免：55—60日龄，新城疫病毒灭活疫苗，1．5～2．0mL／只，肌注；三免：100日龄，新城疫病毒灭活疫苗，3．0～5．0mL／只，肌注；以后每4—5个月加强免疫接种一次，至出售；种鸟免疫接种新城疫病毒油乳剂灭活疫苗，7．0～10．0mL／只。肌注，原则上每6～7个月加强一次，但要避开产蛋高峰期。该免疫程序经现场应用3年，免疫效果良好，至今未见该病的发生流行。     

猪瘟病毒p80基因丝氨酸蛋白酶功能区的原核表达及小鼠免疫试验

根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。     

裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌的体外抑菌效果

为研究裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌体外抑菌试验,采用牛津杯法和肉汤二倍稀释法测定裸花紫珠提取物抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC).结果表明,裸花紫珠提取物对大肠杆菌属于中度敏感,平均抑菌圈直径为16 mm,最小抑菌浓度(MIC)为32.0 mg/mL.试验结果表明,裸花紫珠提取物对鸡源大肠杆菌具有良好的抑菌效果,为下一...     

芪楂口服液对黄羽肉鸡新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影响

为了研究芪楂口服液对鸡新城疫(ND)和禽流感疫苗(AI)的效果,本试验采用完全随机法将6000只1日龄快大黄羽肉鸡随机分成两组,分别为对照组和试验组,试验组分别在1～10,15～21,29～35,43～49日龄时按照0.2 mL/只在饮水中添加芪楂口服液,各组鸡只在7日龄时皮下注射鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫...     

两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2 GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序.结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%～99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%～98.7%之间.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR鉴别诊断方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属,基因组结构为单股正链RNA,长约15.5 kb,含8个开放阅读框(ORF) .经典猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 以母猪发热、厌食、流产、死产、产木乃伊胎和弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征[1].