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利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性. 相似文献
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12只雌性5周龄金仓鼠腹腔注射50μL羊痒病(SCRAPIE)263K株10%的脑组织匀浆。在临床前期,感染后第2、4、6、8、10、12周和临床末期第20周,金仓鼠被分别处死,取大脑、淋巴组织、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织,进行蛋白质免疫印迹杂交实验检测朊病毒病理型朊蛋白PrPSc。研究结果显示在临床前期,通过改进后的纯化技术,我们能够检测出淋巴组织和脾脏组织中的PrPSc,但是在肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织中仍然没有检测到PrPSc。 相似文献
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80年代末,英国开普敦动物保健研究所D·N·Payne及其同事首次从肉种鸡群中分离出一种新型的禽白血病病毒。由于这种病毒的囊膜特性不同于已知感染鸡的禽白血病病毒的5种亚型(A~E),也不同于其他禽类体内发现的禽白血病病毒的4种亚型(F~Z),因而定名为禽白血病病毒J亚型(Av... 相似文献
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本研究建立了检测牛肉中疯牛病特殊风险物质(主要是中枢神经组织)标记物GFAP mRNA的荧光RT-PCR检测技术。试验结果表明:该技术具有良好的种属特异性和组织特异性,只能从牛源和羊源的中枢神经组织中检测到GFAP,猪源和禽源检测结果为阴性,而且只有脑和脊髓等中枢神经组织产生阳性反应,其他内脏组织以及不同部位牛肉检测结果均为阴性;敏感性检测结果表明,该方法最低检测限达到0.001%以下;稳定性试验结果表明,100°C 加热处理30min对检测结果无明显影响,中枢神经组织在30°C以上室温可以稳定存放4天, 在4°C可以稳定冷藏2周,检测结果仍然为阳性。该结果显示,所建立的荧光RT-PCR技术用于牛肉中疯牛病特殊风险物质的检测具有特异性强、敏感性高、稳定性好及快速方便等优点,适合于在日常检测工作中推广使用。 相似文献
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