蓝舌病病毒NS3蛋白抑制细胞Ⅰ型干扰素的产生

蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)是一种双链RNA病毒,能感染多种细胞诱导强烈的Ⅰ型IFN效应,而BTV非结构蛋白NS3对IFN-β的生成有强烈抑制作用,但目前BTV感染与诱导IFN-Ⅰ产生的关联仍不清楚,BTV NS3蛋白如何影响IFN-Ⅰ合成也有待研究。为此本研究通过BTV-1和BTV-16感染人非小细胞肺癌细胞(A549)和犊牛原代肾细胞(MDBK)探索不同血清型、不同病毒载量、不同作用时间的BTV对细胞IFN-Ⅰ产生的影响,通过构建BTV NS3真核表达质粒,探索NS3蛋白对细胞IFN-Ⅰ转录及表达水平的调控和影响。qPCR结果表明BTV-1和BTV-16能感染A549和MDBK并诱发强烈的IFN-β效应,双荧光素酶报告基因结果显示BTV NS3对BTV诱导的IFN-β启动子活性具有抑制作用,且表达量与抑制作用呈正相关。本研究揭示了BTV增殖与细胞产生IFN-Ⅰ的关系,阐明了BTV NS3蛋白对IFN-β转录和表达水平的影响,其结果有助于了解BTV的致病机理及其干扰宿主的天然免疫应答机制,对BTV疫苗研发及抗病毒治疗具有科学意义。     

鸭梨有望走出低谷

鸭梨是我国北方地区一种重要果品。近年来,鸭梨销售价格低迷,甚至出现了卖果难。造成鸭梨市场低迷的主要原因:一是产量增加。二是品质下降。有机肥用量严重不足,氮肥用量偏大,致使果实风味变淡。三是出口受阻。2003年底,美国以中国鸭梨有黑斑病和农药残留超标为由,无限期暂停进口,随后,加拿大也暂停进口。四是无序竞争缺乏行业自律,争相压价损害整个产业。但业界预测鸭梨在今后几年将会逐步走出低谷。理由是:一、供求趋于平衡。由于鸭梨价格持续低迷,使鸭梨主产区栽培面积锐减,总产量降低。二、果品质量逐渐提高。政府有关部门及梨农开始重…     

云南地方乌鸡肠炎沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究

为鉴定云南某地方乌鸡场疑似沙门氏菌感染的病原菌并研究其生物学特性,通过细菌分离纯化、染色镜检、生化试验、血清分型、PCR检测、16S rRNA基因测序分析进行鉴定,并进行了药敏试验、耐药基因、毒力基因检测,以及致病性试验和动物回归试验。结果显示：分离株经纯化后在SS培养基上为圆形,半透明,中心黑色或全黑色光滑菌落;革兰氏染色镜检可见无芽孢、无荚膜的阴性短杆菌;综合沙门氏菌属血清凝集试验、生化试验、PCR检测、16S rRNA基因测序及遗传进化分析结果确定该菌株为肠炎沙门氏菌,命名为SE001株。动物试验表明：该菌株对试验小鼠致病性强,按照0.2 mL/只剂量接种小鼠(菌液浓度1×10⁴ CFU/mL),24 h内死亡率为50%;对不同品种雏鸡致病性存在差异,按照0.2 mL/只剂量(菌液浓度1×10⁸ CFU/mL)接种白羽蛋鸡雏鸡,7 d内全部死亡;而接种茶花鸡雏鸡不会引起死亡,但剖检可见心脏明显病变。药敏试验结果表明：该菌株对阿莫西林、头孢氨苄、庆大霉素、阿奇霉素、恩诺沙星等20种药物敏感;对红霉素、克林霉素中度敏感;对土霉素、四环素、强...     

浒苔与球等鞭金藻相互抑制的实验验证

研究了实验室条件下漂浮绿潮海藻浒苔（Ulva prolifera ）与微藻球等鞭金藻（Isochrysis galbana）之间的相互抑制作用,并对作用机制进行了初步探讨。结果表明,在浒苔和球等鞭金藻初接种量分别为1 gFW/L和1×10⁴ cells/mL的共培养系统中,实验初始阶段（前3 d）NO₃^-、PO₄^3-浓度显著高于浒苔和球等鞭金藻各单培养组,说明共培养系统中浒苔和球等鞭金藻彼此之间产生了显著抑制作用,其中浒苔对球等鞭金藻抑制率为96.62%,球等鞭金藻对浒苔的抑制率为19.67%,从而导致对NO₃^-、PO₄^3-吸收速率的降低;从第4天到实验结束,共培养体系中NO₃^-、PO₄^3-浓度逐渐升高,镜检也显示浒苔和球等鞭金藻细胞发生了断裂、肿胀和死亡现象,而单培养组中NO₃^-、PO₄^3-浓度持续下降,说明共培养系统中由于浒苔和球等鞭金藻的死亡而向培养液中释放了营养盐。本研究表明在营养盐浓度和浒苔生物量相对较低的情况下,浒苔和球等鞭金藻彼此之间存在化感作用。     

曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)的分离鉴定及基因组序列分析

为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO2的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传进化分析,结果显示3株分离株与曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)模式菌株CCUG 74657T及其它M. pernigra分离株的16S r DNA基因序列的同源性达99.6%以上,且3株分离株与M. pernigra参考株形成同一个进化分支,表明3株分离株均为M. pernigra。采用琼脂扩散法检测3株分离株对10类32种抗菌药物的敏感性,结果显示3株分离株对青霉素类的阿莫西林克拉维酸、头孢菌素类的头孢噻吩、喹诺酮类的氧氟沙星等29种抗菌药物敏感。将3株分离株感染小鼠进行致病性试验,结果显示3株分离株均能引起小鼠呼吸道疾病。采用Illumina Miseq和PacBio高通量测序平台对分离株ZY171111进行全基因组高通量测序并预测其毒力基因和耐药基因,基因组序列分析结果显示,分离株ZY171111基因组全长2 ...     

山羊源无枝菌酸棒状杆菌(Corynebacterium amycolatum)的分离鉴定与耐药性分析

为了对1起羊腹泻病例进行诊断,从腹泻病羊粪便中分离到10株革兰阳性棒状杆菌YN21083～YN210812,对分离株进行形态学和16S rDNA基因鉴定并研究其药物敏感性和耐药基因特征。NCBI数据库BLAST比对鉴定结果显示,10株分离株与无枝菌酸棒状杆菌(Corynebacterium amycolatum)德国分离株FDAARGOS＿991的同源性为99.3%～100.0%。16S rDNA基因进化分析显示10株分离株与C.amycolatum参考株形成同一个进化分支,与C.amycolatum参考株之间的同源性为97.2%～100.0%,与C.amycolatum模式菌株ATCC49368^T之间的同源性为98.3%～99.2%,将10株分离株鉴定为C.amycolatum。药敏试验结果显示,10株分离菌株对青霉素、氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢噻吩、头孢呋辛、氟苯尼考、阿米卡星和四环素敏感,对卡那霉素和磺胺甲恶唑耐药。耐药基因PCR检测结果显示,共检测到8种耐药基因aadA1、aadA2、tetA、tetM、qnrS、Sul1、Sul2和Sul3,其检出...     

我国牛羊中山病血清学调查

为了解中山病在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA检测方法,对2016—2018年我国吉林、辽宁、内蒙古、河北、新疆、西藏、湖北、重庆、四川、贵州、云南、广西和广东13个省级区划的8 232份牛羊血清进行检测。结果显示,有12个省级区划检测出抗体阳性,且阳性率有明显的地域性和季节性,由北向南逐渐升高(0～74.03%),秋季阳性率(2.50%～60.00%)明显高于春季(0～10.00%)和夏季(2.22%～35.00%)。乌兰察布、哈密、河池和曲靖等4个采样点的牛羊血清检测发现,牛血清抗体阳性率均高于山羊和绵羊血清。以上结果表明中山病在我国的流行已具有广泛性,流行分布状况与其媒介昆虫的活动有密切关系,并且牛比羊更易被该病毒感染,同时本研究的试验数据将有助于我国更好地了解和防控中山病。     

蓝舌病病毒群特异性RT-LAMP检测方法的建立与初步应用

本研究旨在建立针对中国流行蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.根据我国分离BTV毒株Seg5基因序列的高度保守区域,设计特异性引物,优化反应条件及反应体系,进行特异性及灵敏度验证,建立BTV RT-LAMP检测方法;对46株中国分离的12种血清型BT...     

云南猪源A型多杀性巴氏杆菌 PMJC-1株的分离鉴定

为探明2022年2月玉溪市江川区某规模猪场大批保育猪发病死亡原因,对采集病料进行了细菌分离,从肺门淋巴结分离得到一株菌落表面光滑、湿润、半透明圆形菌株。分离菌株经生化试剂条鉴定为多杀性巴氏杆菌,分离菌株的16S rRNA序列与NCBI GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌PM8-6株的同一性达到99%以上,将分离菌株命名为PMJC-1株。荚膜分型结果显示该菌株为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,毒力基因检测结果显示该菌含有黏附素、超氧化物歧化酶等6种毒力基因。分离菌株药敏试验表明,其仅对利福平、头孢哌酮、阿莫西林、呋喃妥因、头孢噻吩、大观霉素6种药物敏感,对其余18种药物均耐药。动物致病性试验结果显示该菌株对昆明小鼠具有较强致病性,8只实验组昆明小鼠在接种后72 h内发病死亡5只,其余3只发病后耐过康复。本研究结果可为生猪养殖过程中A型多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考。     

山羊源加勒多尼亚链球菌(Streptococcus caledonicus)的分离鉴定及耐药性分析

为了对云南1起山羊皮下脓肿进行细菌学诊断,本研究从皮下脓肿的脓液样品中分离到2株革兰阳性链状球菌YN220769和YN220770,对2株分离株进行形态学、生理生化和16S rDNA基因鉴定并分析其药物敏感性。细菌鉴定结果显示2分离株生化特征与加勒多尼亚链球菌(Streptococcus caledonicus)模式菌株CCUG 73951^T一致;与S.caledonicus参考株之间的同源性为99.6%～100.0%,与S.caledonicus CCUG 73951^T之间的同源性分别为99.7%和99.9%;与5株S.caledonicus参考株形成同一个进化分支;根据鉴定结果,将YN220769和YN220770鉴定为S.caledonicus。致病性试验显示2株分离菌对小鼠有致病性。药敏试验结果显示2株分离菌对青霉素、阿莫西林、头孢噻吩等多种抗生物敏感,对磺胺甲恶唑耐药。本研究首次从山羊皮下脓肿分离到S.caledonicus,证实山羊S.caledonicus感染的存在,对山羊S.caledonicus感染的预防和控制提供了理论依据...