平菇钙调素的分离纯化和性质的研究

钙调素(Calmodulin,CaM)是广泛存在于一切真核生物中的一种多功能调节蛋白,作为细胞内的主要钙离子受体,人们确信它在动物、植物细胞功能活动中起着重要作用,目前有关真菌CaM的研究较少,对真菌CaM性质的系统研究,国内尚无报道。本文从平菇(Pleurotus ostreatus)中分离纯化得到真菌CaM,并做了有关物理化学特性及其生物活性的研究。 一、材料和方法 (一)供试材料 平菇购自南京蔬菜研究所;苯基琼脂糖Phenyl-sepharose CL 4B为Pharmacia产品;DEAE-Cellulose 32为Whatman产品;Ampholyte为中国科学院上海生化所产品,其余试剂均为分析纯。 (二)试验方法 包括以下五个方面。 1.平菇CaM的分离纯化:平菇加入3倍体积缓冲液A(Buffer A:20mmol/l Tris-HCl,1mmol/l)巯基乙醇,0.5mmol/l PMSF,2retool/l EDAT,pH17.5)匀浆10″×6次,8000g离心30分钟,重复抽提,合并上清,加入30％TCA至终浓度为3％,离心,弃上清,沉淀用缓冲液搅匀透析过夜,再加适量缓冲液A,用1mol/l Tris-base调pH17.5,搅拌30分钟,10000g离     

加速老化对穿心莲种子萌发活力的影响

考察了室温和低温贮藏2年的穿心莲种子经41℃、100%R.H.条件下加速老化1~7 d后的萌发活力和萌发过程中幼苗生长量的变化,结果表明:室温贮藏种子的发芽率为0;低温贮藏种子发芽率为93.5%,且老化1~2 d后萌发活力未见显著变化,老化3~4 d后则加速了萌发,老化5~7 d萌发活力和幼苗株高显著下降。因此,低温贮藏是实际可行的方法,对穿心莲种子批进行活力检测时需要老化5 d以上。     

平菇钙调素总结合蛋白的制备及性质研究

钙调素(Calmodulin,CaM)是广泛存在于一切真核细胞中的耐热钙结合蛋白,它的许多功能是通过与CaM结合蛋白的相互作用而实现的。目前CaM结合蛋白是CaM研究的一个活跃领域。一般来说,CaM与CaM结合蛋白的相互作用在有Ca~(2+)较无Ca~(2-)时有更大的亲和力,往往可以利用CaM-Sepharose 4B柱,在Ca~(2+)存在条件下,让CaM结合蛋白结合上去,在EG-