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参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRVH基因,将其克隆至PUC18-T质粒中,转化E.coli JM109感受态细胞,构建并选择PPRVH基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio—TOPO载体中,转化E.coli TOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRVH基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRVH抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2g/L的L-阿拉伯糖诱导5h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRVH蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRVH糖蛋白抗原。 相似文献
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选取水泡性口炎病毒 N基因序列 ,设计 1对引物 ,建立检测水泡性口炎病毒的 RT- PCR方法。对VSV各毒株进行检测 ,结果均为阳性 ,而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性。结果表明所建立的 RT- PCR技术可用于水泡性口炎的诊断和流行病学调查 相似文献
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竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病抗体的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
用已研制的BTV-11型VP7单克隆抗体建立了竞争酶联免疫吸附试验(C-ELISA)检测蓝舌病抗体的方法,并与琼脂免疫扩散试验(AGID)进行了检测比较,C-ELISA特异性强,不与相关环状病毒发生交叉反应,敏感性比AGID高。用研究制备的C-ELISA诊断试剂盒和美国、澳大利亚制备的诊断试剂盒对1377份临床样品的检测,以及对实验动物人工感染后抗体动脉检测。三种诊断试剂盒检测结果一致,且重复性好。本研究建立的蓝舌病C-ELISA是一种特异性强、敏感性高的蓝舌病抗体检测方法。 相似文献
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