人工RNA结合骨架的可溶性表达及其与寡核苷酸链的相互作用分析

为了分析ERBS与其目标寡核苷酸的相互作用,研究设计合成了对应目标寡核苷酸的ERBS基因,并进行了蛋白的原核表达、纯化以及其与目标寡核苷酸的相互作用分析。结果发现,ERBS在Escherichia coli BL21(DE3)中表达时呈现包涵体状态,而改变宿主细胞为Escherichia coli Rosetta(DE3),可极大提高其可溶性表达水平;纯化的ERBS与FAM标记的寡核苷酸互作分析发现,其解离常数为(9.76±0.62)nmol/L。试验结果可为深入研究不同ERBS与其目标寡核苷酸的相互作用奠定基础。     

超声波提取安吉白茶茶多酚工艺的优化

为安吉白茶茶多酚的工业化开发应用提供参考,通过响应面试验优化安吉白茶中茶多酚的超声波提取工艺。结果表明:安吉白茶提取茶多酚的最优提取工艺条件为安吉白茶与水的比例为1∶50,超声波水浴提取66min,提取3次,该提取条件下的茶多酚提取含量最高,为182.6mg/g。     

嗜热芽孢杆菌丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达纯化及活性分析

偶联法测定酶的活性是常用酶活测定方法之一。核苷二磷酸(NDP)是核苷三磷酸的β,γ高能磷酸键水解产物之一,丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)是用来测定NDP生成的常用偶联酶。为了分析嗜热菌苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus JH-7)(最适生长温度为50℃)的PK和LDH是否可以作为50℃条件下的偶联酶,研究从Aeribacillus pallidus JH-7基因组中克隆pk和ldh,连接到表达载体pET24a。结果表明,经诱导表达、纯化得到纯度达95%以上的Ap PK和Ap LDH。并利用分光光度法,分别对Ap LDH和Ap PK的动力学常数及催化效率进行了分析。结果表明,Ap PK对NDP的最适底物为ADP,催化效率为5×104 mol/(L·s),最适p H值为8.0,最适温度为45℃;NADH为Ap LDH的最适底物,催化效率为3.7×105 mol/(L·s),最适pH值为5.8,最适温度为35℃。虽然50℃不是Ap LDH和Ap PK的最适温度,但它们在此温度下的kcat分别为16.4,64.5 s-1,暗示它们可以作为此温度下的偶联酶。