从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料,DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力为抗氧化活性的评价指标,通过胰蛋白酶进行酶解,依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱（Sephadex G-75）对酶解产物进行分离纯化,筛选出活性较高的组分;采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解,通过凝胶过滤色谱（Sephadex G-15）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化其酶解产物;采用质谱技术（ESI-TOF MS/MS）对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到3个活性组分（峰）P_a、P_b、P_c,采用DPPH法和Fe²⁺螯合能力测定法测定其抗氧化活性的结果都显示,在3个组分中,提取率为23.1%的组分P_b抗氧化活性最强（P＜0.05）,因此选取组分P_b进行下一步碱性蛋白酶酶解。该酶解物经Sephadex G-15分离后得到P_d和P_e两个组分（峰）,经抗氧化活性测定,选取提取率为52.1%的高抗氧化活性组分P_d（P＜0.05）进一步通过RP-HPLC进行疏水性分离,得到P₁、P₂、P₃、P₄、P₅五个活性组分（峰）,其中提取率为7.3%的组分P₃的抗氧化活性最强（P＜0.05）,其DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力的EC₅₀值分别为1 mg·mL^-1、0.6 mg·mL^-1。最后通过质谱技术（ESI-TOF MS/MS）鉴定组分P₃的结构,得到其氨基酸序列为AREGETVVPG,分子量为1 013.51 Da,纯度约为85%,与用化学方法合成的多肽AREGETVVPG（纯度95%以上）的抗氧化活性相比,结果没有显著差异（P>0.05）。【结论】二步双酶酶解结合超滤膜、凝胶过滤色谱和RP-HPLC等蛋白分离纯化技术为直接得到单一的高活性抗氧化肽提供了技术参考。     

羧甲基纤维素钠对大豆分离蛋白骨粘合性能的影响

【目的】以体外动物骨骼为试验对象,研究羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对大豆分离蛋白（soybean protein isolate,SPI）胶粘合性能的影响,探讨其作为医用骨粘合剂的潜在可能。【方法】利用动态流变仪、圆二色光谱（CD）、ANS荧光探针法、扫描电镜等方法,分析CMC-Na对SPI胶零切黏度、二级结构（α-螺旋,β-折叠,β-转角和无规则卷曲）、疏水性、表面形态的影响,并结合以体外动物骨骼为试验对象,用万能材料试验机测定CMC-Na对SPI胶粘合强度的影响。【结果】SPI胶的粘合强度随着浓度的升高而增大,浓度大于10%时粘合强度呈下降趋势;微量CMC-Na（0.01%）的添加能显著提高低浓度SPI胶（2%）的粘合强度（是未添加时的2.4倍,P<0.01）。且粘合强度和零切黏度呈显著正相关关系（r=0.815,P=0.036）;微量CMC-Na的添加能改变SPI胶的二级结构,其中β-折叠含量由42.2%上升至49.1%,β-转角由2.1%上升至7.3%,α-螺旋由28.0%下降至19.7%,无规则卷曲由27.7%下降至23.9%。CMC-Na的添加提高了SPI胶的疏水性,适度的疏水改性有助于增强粘合强度。扫描电镜图谱显示,CMC-Na的添加使SPI胶表面颗粒的排布更加规整和致密,更利于与骨骼粘合。【结论】CMC-Na的添加,导致SPI胶二级结构的改变。α-螺旋含量降低而β-折叠含量增加,表明蛋白质分子展开程度增加,内部疏水基团暴露,表面疏水性提高,增加了SPI胶零切黏度,从而显著提高低浓度SPI胶的骨粘合强度;而低浓度SPI胶更利于机体吸收。因此,添加CMC-Na的SPI胶更有潜力作为骨粘合剂应用于医疗领域。     

小麦胚芽稳定化技术的比较研究与展望

小麦胚芽具有极高的营养价值,蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素及生物活性物质含量丰富,是一种理想的健康食品原料.但小麦胚芽由于自身脂肪含量较高且脂肪酶、脂肪氧化酶活性较高,导致它极易酸败变质,耐储性差,影响其进一步的开发利用.因此,为了延长小麦胚芽保鲜期,使其营养和功能性成分得到最大程度的保留,研究与开发小麦胚芽的稳定化技术非常必要.在分析国内外小麦胚芽稳定化技术与方法的基础上,提出了小麦胚芽稳定化技术选择的原则和展望.