甜柿密植丰产栽培技术

<正>甜柿果实成熟后不需后熟即可食用,且可溶性固形物含量高,果肉甜脆爽口,深受消费者欢迎,市场前景十分广阔。近10余年来,我国柿主产区陆续引入一些日本甜柿品种,在各地进行试栽观察,有的品种正在生产中推广,对改善我国柿品种结构起到了积极的作用。为探讨甜柿丰产栽培的综合管理技术,我们于1997-2003年进行了本项试验,取得良好的效果,现将试验结果简介如下。     

鼠层粘蛋白α5链E3、LG4、LG5片段的克隆及表达

从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性     

HBV/HAV复合抗原基因在CHO细胞中的表达

为探讨HBV／HAV复合疫苗的可行性，利用DNA重组技术将HBsAg与HAW复合多表位抗原基因VPX进行融合，插入到真核表达质粒pVAX1多克隆位点，构建成核酸表达疫苗pVAX1／SVPX，将其转染CHO细胞。转染细胞培养48h后，进行RTPCR、Western-blot、ELISA分析，结果表明HBV／HAV复合抗原基因SVPX能够在CHO细胞内转录、表达，融合蛋白具有HBV和HAV抗原的特性。     

色素万寿菊组织培养培养基组成的初步研究

以色素万寿菊腋芽作为外植体材料,筛选各个阶段的培养基配方,研究色素万寿菊的组织培养技术。结果表明：MS＋BA 0.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L对腋芽诱导芽的效果最好;MS＋BA 1 mg/L＋NAA 0.01 mg/L为继代培养基的适宜配方;1/2MS＋IBA 0.1 mg/L生根效果很好。     

H5亚型禽流感病毒HA基因在WISH细胞中的瞬时表达

在WISH细胞中,对H5亚型禽流感病毒HA基因进行了瞬时表达的研究。首先构建了真核表达质粒pVAX-H5HA,通过酶切和PCR筛选阳性克隆后测序。然后将重组表达质粒以脂质体介导法转染WISH细胞。通过RT-PCR在转录水平检测目的基因的表达,间接免疫荧光检测目的蛋白。结果表明,HA基因在WISH细胞中进行了表达。     

CHO表达生长激素释放因子的生物活性测定

在对生长激素释放因子(GRF)基因改造和化学合成，并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上．用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达，采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的GRF(1-32)进行了体外生物活性测定，即先将垂体用酶进行消化，再将消化细胞培养，形成单层细胞，利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明：表达产物可刺激生长激素释放，并且比对照组提高3．8倍，     

鸡p15INK4B基因的克隆表达及纯化

为研究鸡p15INK4B蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,应用引物搭桥法合成p15INK4B基因,应用基因工程的手段构建p15INK4B基因的原核表达载体,在E.coliRosetta(DE3)菌进行融合表达,并对表达产物进行亲和层析纯化。结果成功地构建了p15INK4B基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。     

HAV表位抗原与HBV核心抗原融合基因的原核表达

为探讨甲肝DNA疫苗的可行性,利用DNA重组技术将甲肝病毒（HAV）复合多表位抗原基因VPx插入到乙肝病毒核心抗原（HBcAg）基因中,得到CVPx融合基因。将CVPx克隆到原核表达载体pET-28a（＋）中,并在大肠杆菌中进行表达,表达的蛋白进行Western Blot及ELISA检测,结果表明：融合蛋白具有甲肝病毒表位抗原的反应原性。     

色素万寿菊雄性不育性状生理特性研究

为深入研究色素万寿菊雄性不育性状生理生化遗传机理,本文研究了色素万寿菊W217不育株、可育株在不同花发育时期的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、游离脯氨酸、可溶性糖含量。结果表明,色素万寿菊W217POD活性在从叶片到成花的过程中呈明显降低趋势,不育株在花蕾到花过程中POD活性高于可育株POD活性;SOD活性在不育株和可育株中变化趋势均为低-高-低,且不育株明显高于可育株;MDA含量在可育株中变化由高到低,而在不育株中呈低-高-低变化,在花蕾时期不育株中MDA含量明显高于可育株中MDA含量;在不育株和可育株中由叶到花过程中游离脯氨酸含量变化均呈减少趋势,在叶片时期不育株和可育株游离脯氨酸含量无明显差别,不育株花蕾到成花时期游离脯氨酸含量明显低于可育株;可溶性糖在不育株和可育株中含量由叶到花时期均呈增高趋势,且可育株增高幅度大于不育株。     

马立克氏病毒感染鸡的端粒酶活性及其病毒血症的动态研究

1日龄非免疫鸡分别人工感染马立克氏病病毒(MDV)I型国际标准强毒GA株、I型MDV疫苗毒CVI988株后,从第5日起,定期采血,用本实验室改进的Trap法和Bandscan软件测定、分析并计算感染过程中其外周血液单核细胞(PBMC)的端粒酶活性变化;同时用抗MDV囊膜糖蛋白B(gB)单克隆抗体介导的间接免疫荧光试验检测MDV在外周血液单核细胞中的感染状况。结果表明,自接种I型强毒GA株后,端粒酶在没有临床症状和可视病变出现之前就可检测到,并且随着MDV感染后日龄的增加逐渐升高,在25日龄时其相对活力达到最高值;而接种CVI988后,整个生长过程端粒酶活性均呈阴性。从感染第5日到鸡发病死亡前,都能检出GA株引起的病毒血症,并于18～22 d左右达到高峰;而接种CVI988株后第5日到第20日止,能检出病毒血症,并于第10～12天左右达到高峰。