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新发PDCoV和TGEV双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
猪Delta冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新发现的冠状病毒,临床上主要引起感染仔猪出现水样腹泻、呕吐和脱水等症状,和猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染引起的临床症状极为类似,且临床上PDCoV和TGEV混合感染时有发生,单靠临床诊断很难区分两种疾病,因此建立同时检测且区分PDCoV和TGEV的检测方法具有重要的临床意义.本研究根据GenBank中收录的PDCoVN基因和TGEVN基因序列设计了2对引物,在同一反应体系中同时扩增PDCoV的N基因片段和TGEV的N基因片段,通过对RT-PCR反应条件的优化,建立了同时检测PDCoV和TGEV的双重RT-PCR方法,并对该方法进行了特异性、灵敏性和重复性研究.结果显示,所建立的双重RT-PCR对PDCoV和TGEV的最低检测量分别是3.14×102 copies/μL和3.68× 103 copies/μL,利用该双重RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪博卡病毒(Porcinebocavirus,PBoV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)和猪伪狂犬病毒(P.pseudorabiesvirus,PRV)的扩增结果均为阴性,显示出较好的特异性.为了解所建立的双重RT-PCR方法的临床应用效果,对252份临床样品进行了检测.结果表明,双重RT-PCR检出PDCoV阳性样品31份(阳性率为12.30%),TGEV阳性样品12份(阳性率为4.76%),同时感染PDCoV和TGEV的阳性样品2份(阳性率为0.79%),且检测结果与单一PDCoV和TGEV RT-PCR相符.因此,本研究所建立的双重RT-PCR方法可用于PDCoV和TGEV的临床检测,为进一步研究PDCoV和TGEV的临床鉴别诊断和流行病学调查提供了理论依据和技术支持. 相似文献
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猪Delta冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)是一种新发现的仔猪腹泻类冠状病毒,感染仔猪主要表现出水样腹泻、呕吐和脱水等临床症状,和猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)临床症状极其类似,且临床上混合感染病例较多,单靠临床症状和剖检变化很难辨别这2种疾病,因此建立同时检测且能区分PDCoV和PEDV的检测方法具有重要意义。参照GenBank登录的PDCoV M基因和PEDV ORF3基因特异性序列设计引物,扩增相应的基因片段,克隆构建重组质粒pMD-18T-PDCoV-M与pMD-18T-PEDV-ORF3,测序验证后,分别以此重组质粒为标准品,建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR方法,并对其扩增体系和扩增条件等进行了优化,同时对所建立的双重荧光RT-PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行了检测。结果显示,该试验成功建立了能同时检测PDCoV和PEDV的SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR方法,最低能检测到PDCoV和PEDV分别是28.6拷贝/μL和99.6拷贝/μL的质粒浓度,显示出较好的敏感性;在同样扩增条件下该方法具有较好的重复性;特异性试验表明,该方法仅能检测出PEDV和PDCoV,而对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PRV)等均不产生特异性扩增曲线。将所建立的双重荧光RT-PCR方法以及单重荧光定量RT-PCR方法分别对198份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV和PDCoV检测,结果显示,PDCoV阳性样品41份,阳性率为20.7%;PEDV阳性样品59份,阳性率为29.8%;同时感染这2种病毒的样品17份,阳性率为8.6%。与单重荧光定量RT-PCR方法对PEDV和PDCoV的检出率一样,符合率100.0%。本研究成功建立了PDCoV和PEDV的双重荧光RT-PCR方法,能同时准确地检测PDCoV和PEDV,这为PDCoV和PEDV的临床鉴别诊断和流行病学调查研究奠定基础。 相似文献
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目的:为了进一步阐明光照对鸡生产性能的神经调节机制,为养鸡生产科学利用光照和兽医神经外科学提供一定的理论依据,用HRP追踪技术对鸡脑光信息通路的对侧联系进行了观察。方法:用脑立体定位仪向鸡脑圆核注射微量3%WGA-HRP,存活30小时后灌流固定,取脑并制作冰冻切片,用TMB法检测鸡脑光信息通路中投射向对侧的HRP标记神经细胞。结果:将WGA-HRP注入圆核后,除在同侧鸡离顶盖光信息通路的中央灰质层(SGC)和SP/IPS核见有大量HRP标记神经细胞外,在对侧SGC、SP/IPS核和圆核也观察到了一些HRP标记神经细胞体和纤维,但其数量较少,分布范围小,在对侧圆核的不同部位HRP标记细胞和纤维分布位置不同,标记范围呈前后小中间大的纺锤状。讨论:结果表明鸡离顶盖光信息通路主要是同侧投射,也有部分对侧投射。对侧投射可能通过对同侧投射辅助和抑制作用来整合信息,使特定单元结合和处理来自双眼的信息,有助于大脑获得更加精确而全面的信息。 相似文献
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肉鸡肠道疾病严重影响着养鸡业的发展,利用益生菌防治肉鸡的肠道疾病已成为当今的研究热点。本文综述了益生菌的特点、肠黏膜免疫屏障、益生菌对肉鸡肠黏膜免疫屏障的作用(调节肠道内微生物的平衡、预防和治疗肠道炎症、增强肠道的免疫屏障),旨在阐明益生菌在肉鸡肠黏膜免疫屏障中的研究进展,为规模化养殖场合理使用益生菌提供理论依据。 相似文献
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研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转录时相变化。结果显示,PPV感染PK-15细胞后,TLR1在PPV感染后3h表达上调,约为对照组细胞的3.1倍,其他时段均低于正常水平;TLR3和TLR7 mRNA表达水平在病毒感染早期均低于正常水平;TLR4和TLR8的mRNA含量均在感染后3、12、36 h表达上调,TLR10分别在在3h和36 h表达上调,其他时段均不同程度的降低;而TLR2和TLR9 mRNA表达水平在感染后24 h开始升高,并于48 h达到峰值,分别为对照水平的10.1倍和26.7倍。研究表明,PPV感染PK-15细胞后能够诱导细胞上TLR2和TLR9在mRNA水平显著上调,PPV感染可能通过TLR2和TLR9受体介导感染。 相似文献
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调查郑州市三家宠物医院确诊的40例患犬膀胱结石症,分析患犬的品种、发病年龄、性别、饲养环境和诊治情况。结果显示犬膀胱结石多发于京巴、雪纳瑞、比熊等小型犬,雄犬比雌犬多发,老龄犬发病率较高。 相似文献
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为进一步探究光照对母鸡生产性能影响的神经调节机制,采用神经标记和免疫组化技术相结合的方法,对不同强度光照对母鸡离顶盖通路c-fos基因表达的影响进行了观察研究.将120日龄母鸡右眼遮光5d后向丘脑圆核引入微量30%HRP,48 h后解除遮光并给予不同强度的光照刺激1~1.5 h,暗适应1.5h后灌流固定,取脑制作连续冰... 相似文献
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