大豆上烟环斑病毒的塑珠酶联免疫吸附测定

 酶联免疫吸附测定法,灵敏度高,使用抗血清仅微量,是近年来用于诊断、鉴定植物病毒的先进方法之一。这一技术需要纯度高的抗血清,采用蛋白质A-琼脂糖CL-4B柱层析纯化后的抗烟草环斑病毒抗血清(抗TRSV-IgG),纯度高、灵敏,很适用于塑珠酶联免疫吸附测定法(Bead-ELISA)的抗体和酶标抗体的材料。     

大豆的烟草环斑病毒提纯、抗血清制备和蛋白质A—琼脂糖CL-4B柱层析纯化抗血清的研究

大豆的烟草环斑病毒(TRSV)在温室里按种繁殖于黄瓜(Cucumis Saliva cv.SelectedNational)苗上,分批接种和采收,榨取病毒汁液。用差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯,每批提纯程序一致和植株生长繁殖日数大致相同,但仍存在一些人为的差异。提纯后最高病毒浓度为12.20毫克/毫升,但一般多为2.78～4.54毫克/毫升。子叶开展后第2天接种,经12日左右收获的材料提纯病毒收量最高。蔗糖密度梯度离心对本病毒的提纯效果很好。家兔免疫注射每次用0.5毫克/毫升浓度的提纯 TRSV 收得较好的抗血清,提高剂量并未能增高抗血清的效价。蛋白质 A-琼脂糖 CL-4B 亲和性柱层析是一项先进技术,对纯化抗血清起到显著作用。由于抗血清的精提纯,要滤去一些杂质,经此柱层析纯化后,纯化的抗血清约为原量的25.27%。这种抗 TRSV—IgG 灵敏度高,用量很少,适于 ELlSA 研究之用。