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通过探究根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的烟草瞬时表达体系的影响因素,确定烟草瞬时表达的最佳条件,为目的基因的功能研究提供技术支持。利用马铃薯晚疫病抗性基因RB和致病疫霉菌效应基因Avrblb 1作为报告基因,采用农杆菌介导的注射渗透法,摸索农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定烟草高效的基因瞬时表达条件。研究结果表明:介导烟草基因瞬时表达的根癌农杆菌菌悬液适宜OD600值为0.3~0.8;在菌悬液OD600值为0.1及以上时,AGL1、GV3101和C58C1介导的报告基因瞬时表达效率相似,均引发较强的叶片坏死反应;在农杆菌菌悬液OD600值小于0.1时,AGL1介导的瞬时表达效率最高。测试的烟草品种都具备较高的瞬时表达效率,苗龄6~8周的烟草适合分析。通过测试农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定本氏烟和普通烟均可实现基因高效瞬时表达的条件。 相似文献
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红三叶组织培养及再生植株 总被引:9,自引:2,他引:7
本文采用MS,B5和PC一L2作为基本培养基,在不同激素组合条件下对红三叶(Trifoliumpratense)子叶及下胚轴进行组织培养。在MS,B5和PC一L2附加2mg/L2,4-D和0.5mg/LBA的培养基上,子叶及下胚轴愈伤组织诱导率均在89%以上。愈伤组织继代在B5无机盐十三倍MS有机成分+3%蔗糖+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/L6BA0.2mg/LNAA,+10mg/LVc的培养基上生长良好。愈伤组织在B5附加0.1mg/L6BA+0.2mg/LIBA的培养基上再生植株。下胚轴在MS附加2mg/L6BA+1mg/LNAA的培养基上直接分化形成丛生苗,转入无激素NS培养基上再生根。实验表明VE,Vc,PVP和活性碳对愈伤组织褐化有抑制作用,10mg/LVc抗褐化作用最好。 相似文献
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