黄瓜花叶病毒丹参分离物的鉴定和外壳蛋白基因序列分析

 丹参(Salvia miltorrhiza Bge.)为唇形科鼠尾草属草本植物,以根入药,是我国一种常用大宗中草药。近年来河北安国中药材基地丹参上一种退化病十分严重,该病田间发病率高,有的田块高达60%~80%,表现为花叶、斑驳、卷叶、黄化、矮化等症状,严重影响了丹参的产量和品质。我们利用生物学、电镜观察、血清学方法和基因序列测定等方法对病原进行了初步研究,发现黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)与该病害密切相关     

减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的克隆与真核表达载体的构建

应用降落PCR技术扩增出减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因并将其克隆至pMDT-18载体上,酶切、PCR及测序结果表明插入的片段为目的基因.切下该目的基因定向克隆至pcDNA 3质粒构建六邻体蛋白基因真核表达载体pcDNA 3-hexon,经各种酶切、PCR鉴定及进一步测序鉴定,证明六邻体蛋白基因片段所插入的位置、大小、核苷酸序列和阅读框架正确无误,从而为下一步的转染、表达及进一步阐明EDSV六邻体基因结构与功能的关系和减蛋综合征基因工程苗的研究奠定了良好的基础.     

黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析

从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%～ 99 4%和95 9%～ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%～ 79 0 %和81 2 %～ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。     

抗除草剂转基因小麦生态安全评估(二)——普通小麦与其近缘植物的属间和种间杂交研究

以普通小麦为父本,以与小麦亲缘关系较近的黑麦、偃麦草和山羊草等属中7个种的10个品种为母本进行人工杂交,结果表明普通小麦与卵穗山羊草的可交配性最高,其两个品种Ae23和Y100与普通小麦的杂交结实率分别为11．96％和14．10％,与黑麦杂交的结实率最低,授粉496朵,未结1粒,与其他近缘种的杂交结实率介于前二者之间。与倍性高的种相比,二倍体种与普通小麦之间的可交配性要差,其杂种幼胚在培养基上也很难出愈。所得杂种的育性非常低,甚至雌雄蕊均不育。由此看来,自然条件下普通小麦基因漂流到野生近缘种中的可能性非常低,通过转基因小麦田间释放产生“超级杂草”是非常困难的。     

霞草红树莓复合饮料的研制

[目的]以霞草和红树莓为主要原料,研制霞草红树莓复合饮料。[方法]采用正交试验确定霞草汁的最佳浸提条件、复合饮料最佳配方和复合稳定剂的添加量。[结果]霞草汁最佳浸提条件为料液比1∶1（g/ml）,pH值7,浸提时间5h,浸提温度90℃。最佳配方为霞草汁用量50%（V/V）,红树莓汁用量30%（V/V）,白砂糖添加量45g/L,柠檬酸添加量0.5g/L,在此配方下复合稳定剂的最佳配比为黄原胶10.04mg/ml,柠檬酸三钠0.12mg/ml。[结论]在最佳条件下生产的复合饮料,经感官审评、理化指标和微生物指标检验均合格,故霞草红树莓复合饮料口感好、风味独特、工艺简单,含有丰富的营养成分,并且有药用价值和保健功能,具有较好的推广价值。     

甜瓜属野生种Cucumis hystrix Chakr.胞质葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的克隆与启动子结构分析

根据植物葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH,EC1.1.1.49)氨基酸保守区域,设计简并引物,采用RT-PCR技术克隆得到甜瓜属野生种Cucumis hystrix Chakr.(2n=24)G6PDH基因cDNA片段;随后基于该序列设计特异引物,PCR方法筛选野生种BAC文库,获得2个BAC阳性单克隆。测序后获得了G6PDH基因全序列及其上游启动子序列,GenBank登录号:JQ771576。序列分析显示:G6PDH基因全长约6.5 kb,由15个外显子和14个内含子组成;内含子序列均符合5’-gt-ag-3’结构。外显子拼接后获得了G6PDH基因的开放阅读框(ORF)序列,序列全长1 551 bp,编码516个氨基酸,与黄瓜基因组网站公布的G6PDH基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为98.71%和99.03%。野生种G6PDH氨基酸序列N端缺少转运肽序列,确定为野生种胞质G6PDH。氨基酸序列与烟草、马铃薯、荷兰芹、猕猴桃、拟南芥、大豆、小麦、玉米、葡萄、杨树等植物胞质G6PDH同源性高达77%以上。系统发育树分析发现,甜瓜属胞质G6PDH与茄科植物最先聚类,植物胞质G6PDH在分子进化水平上与物种进化相符。启动子结构分析表明:序列含有启动子基本元件TATA-box、CAAT-box,还含有丰富的光响应元件,与环境胁迫响应相关的不同顺式作用元件,促进高水平转录的5UTR Py-rich stretch元件和提高表达的CAT-box元件等。     

山区公路工程中软基处理常见方法——结合工程实例分析

道路建设中,软基处理是常遇见的问题。本文结合工程实例具有代表性的两处软基的处理方法做一些探讨。     

2006年猪病发病特点、成因分析及防控策略

近年来,随着养猪规模化程度的提高及一些免疫抑制病的影响,猪病感染多呈混合感染,其流行症状和病变多呈非典型的趋势,流行势态日趋复杂和多样化,因此单凭临床诊断已经非常困难。鉴于以上原因,河南省动物疫病预防控制中心在进行猪病诊断时除进行常规的流行病学调查、临床症状、病理剖检诊断外,还着重加强了猪病的病原学PCR快速诊断。猪病病原学PCR诊断数据对于复杂猪病的快速确诊、流行规律与趋势、疫苗防疫效果分析等起到了重要作用。现根据本中心2006年全年猪病病原学和血清学检测及临床常规诊断结果对2006年猪病的发病特点、病因及防控…     

芦粟保优栽培试验及栽培技术

芦粟是禾本科高梁属一年生草本植物，为高梁的一个变种。圆锥状花序，穗直立，茎秆富含糖分，是一种糖料作物，也是一种优良的饲料作物和能源作物，在我国栽培历史悠久，分布广泛，特别是在长江下游地区尤为普遍。芦粟在中国北方叫甜秫秆，南方叫芦橡。芦粟是本地区老百姓的传统食品，其口感清凉，具有开胃、通气的功效，不仅富含糖分，还含有多种微量元素，具有一定的保健作用；且芦粟榨汁可作为餐桌的上好饮料。因此，城乡许多市民都有喜食芦粟的习惯。[第一段]     

河南：提高规格加强建设

近年来,河南省以开展全省性的技能竞赛活动为载体,以《河南省动物疫病预防控制中心综合防控能力积分制管理办法》为纽带,以实行“河南省动物疫病监测检验技能资格证书”制度为手段,以“科技、和谐、发展”讲坛为平台,以引进高技术人才为标杆,不断加强队伍建设,初步建立了一支工作作风扎实、操作技能娴熟、实践经验丰富、业务技术全面的动物疫病防控队伍,为科学防控动物疫病、保障公共卫生安全和现代畜牧产业发展提供了人才和智力支持。