结核分枝杆菌热休克蛋白70启动子的克隆和测序

根据结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）热休克蛋白70启动子的基因序列设计1对引物，PCR扩增出150bp的片段后连接到pMD18-T载体上．用重组质粒载体转化大肠杆菌DH5α，PCR鉴定转化菌后进行序列测定。结果表明．该序列与己报道的3株结核分枝杆菌和1株牛型分枝杆菌的相应序列完全同源。该序列可用于构建大肠杆菌-分枝杆菌牟梭质粒载体．启动外源基因在卡介苗菌中的表达。该基因的克隆可为下一步研究开发人和动物以卡介苗为载体的多价活疫苗打下基础。     

鸡多杀性巴氏杆菌的鉴定和药物敏感试验

从某鸡场病鸡的组织病料中分离出4株疑似多杀性巴氏杆菌的菌株,根据已报道的巴氏杆菌特异序列设计引物进行PCR检测,同时对这些菌株进行细菌生化鉴定,动物接种试验和药敏试验。结果表明,这4个菌株均扩增出一条1200bp左右的DNA带,与预期的大小一致。生化试验结果也与巴氏杆菌的理化特征吻合。说明本试验所设计的引物在鉴定巴氏杆菌病时具有很高的特异性和灵敏度,可作为该病诊断的可靠方法加以推广和应用。动物致病性试验和药敏试验的结果表明,该巴氏杆菌菌株有较强的致病性,且都对先锋噻肟高度敏感。     

黑曲霉尿酸氧化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：：为大量生产医用尿酸氧化酶,对一个黑曲霉菌株的尿酸氧化酶基因进行了克隆和在大肠杆菌中的异源表达。方法：基因测序结果显示,克隆的黑曲霉尿酸氧化酶基因全长为909bp,编码302个氨基酸残基。SDS-PAGE和非变性电泳分析结果显示,单体酶分子量在35~37kDa 之间；表达过程中酶蛋白分子自我组装成4聚体蛋白,聚合体蛋白的表观分子量为140~150kDa。结果：酶蛋白在大肠杆菌细胞液中表达,产物几乎完全以水溶状态存在,最佳溶解 pH 为8.0。最佳酶促反应温度为35℃。经过诱导表达后的菌体,按照1∶20(质量/体积)比例重悬于最优缓冲液中,进行超声波破碎后,粗酶液活力为67.69IU/mL,比活性为47.00IU/mg。结论：提供了一个微生物来源尿酸氧化酶新的获取方法。     

铅和维生素C对儿童骨发育影响研究进展

提高成年早期的峰值骨量是预防骨质疏松症的重要措施，而儿童时期骨密度持续增长，是影响获得最佳峰值骨量的关键时期。该文就影响儿童期骨发育的因素、生命前期获得的骨量与中老年期骨质疏松的关系、铅毒对骨发育的危害、维生素C对骨发育的促进作用弄口对骨铅毒防治作用等。综述了近年的一些最新观点。     

脐血维生素C水平及其对血钙、碱性磷酸酶的影响

目的:通过定量测定新生儿脐血维生素C水平、总碱性磷酸酶活性(ALP)及血钙水平,了解胎儿期维生素C的营养状况,探讨三者之间的关系。方法:采用常规生化方法对178例新生儿脐血进行维生素C、ALP和血钙定量测定,采用SAS软件包对检测数据进行均数、标准差、方差分析和卡方检验等分析处理。结果:178例新生儿脐血维生素C为16.49±5.99μmol/L。其中低于17μmol/L者72例,占40.45%;总碱性磷酸酶141.72±41.63 U/L。其中高于145 U/L者62例,占34.83%;血清钙2.43±0.48 mmol/L,其中低于2.23 mmol/L者16例,占8.99%。维生素C水平降低组的ALP增高率比正常组略高,分别为41.67%和30.19%,但差异无显著性(P>0.05)。维生素C水平降低组的血钙降低率明显高于正常组,差异有显著性(P<0.05);血钙降低组的ALP增高率明显高于血钙正常组(P<0.01)。结论:脐血维生素C水平偏低,低血钙可能与低维生素C有关,提示母孕期在补充维生素D的同时应考虑维生素C的补充。ALP的增高与低血钙相关,与低维生素C水平无明显相关。     

结核分枝杆菌热休克蛋白70启动子的克隆和测序

根据结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70启动子的基因序列设计1对引物,PCR扩增出150 bp的片段后连接到pMD18-T载体上,用重组质粒载体转化大肠杆菌DH5α,PCR鉴定转化菌后进行序列测定。结果表明,该序列与已报道的3株结核分枝杆菌和1株牛型分枝杆菌的相应序列完全同源。该序列可用于构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒载体,启动外源基因在卡介苗菌中的表达。该基因的克隆可为下一步研究开发人和动物以卡介苗为载体的多价活疫苗打下基础。     

不同pH下10种鱼尿酸酶活性的比较研究

为寻找一种新的理化性质与人体内环境比较接近的尿酸酶，对10种鱼肝组织尿酸酶活性进行了测定，并对其最佳提取pH进行了比较。结果显示：10种鱼肝组织在pH6．8～11．1范围内均可测到尿酸酶活性．其酶活性范围为0．064～0．644U；在pH6．8、7．5、8．4和pH11．1条件下鲢（Hypophthalmichthys molitrix）、翘嘴红鲐（Erythroculter ilishaeformis）、鳜（Siniperca chuatsi）、团头鲂（Megalobrama amblycephala）、黄颡鱼（Pseudobagrus fulvidraco）、鲶（Silurus asotus）、银鲫（Carssius auratus gibelio）、鲤（Cyprinus carpio）、鳙（Aristichthys nobilis）、草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肝组织中尿酸酶平均酶活力分别为0．405、0．356、0．306、0．287、0．278、0．204、0．168、0．128、0．123、0．094U。在pH7．5缓冲液抽提条件下，活性较高的是翘嘴红鲐（0．402U）、团头鲂（0．301U）、黄颡鱼（0．297U）。以肉食性鱼类或以动物性食物为主食的鱼类肝组织尿酸酶活性较高，以植物性食物为主食的鱼类肝组织尿酸酶活性较低。翘嘴红鲐、团头鲂和黄颡鱼尿酸酶的理化性质比较适合人体内环境；与猪比较（猪肝组织平均酶活力0．206U），鱼肝组织中的尿酸酶催化尿酸氧化反应的酸碱稳定pH范围较大，特别是在pH7．5条件下仍具有明显活性。该结果可为今后筛选临床应用的尿酸酶参考。     

猪圆环病毒2b型病毒样颗粒表面可用于外源肽展示的位点分析

为了分析猪圆环病毒2b型病毒样颗粒(virus-like particles of Porcine circovirus type 2b, PCV-2b VLPs)表面具有外源肽展示潜力的位点,试验通过PyMol软件分析了PCV-2b VLPs表面的位点分布,并以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Gp5的中和表位B(Epitope B, EpB)为外源肽,通过重叠PCR方法将表面位点替换为EpB,构建EpB嵌合的PCV-2b衣壳蛋白(Cap),利用原核表达系统诱导表达后进行凝胶层析纯化和Western-blot检测,并利用透射电子显微镜分析VLPs的组装状态。结果表明：在PCV-2b VLPs表面共筛选到8个可用于外源肽展示的位点,分别为S1(Y⁵⁰TIKRTTVKTP⁶⁰)、S2(L⁷⁵PPGGGSN⁸²)、S3(F¹²⁴VTKATAL¹³¹)、S4(V¹⁶¹LDSTIDY¹⁶⁸)、S5(Q     

多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的建立

为了研究多杀性巴氏杆菌的PCR检测方法,试验采用特异性引物对32个经鉴定为巴氏杆菌的菌株以及其他5种常见的病原菌进行了扩增。结果表明:该引物对巴氏杆菌的检出率达到91%,对其他5种病原菌的检测结果均为阴性。说明试验所设计的引物可用于巴氏杆菌感染的诊断。     

鸡传染性贫血病毒VP1基因的原核表达

根据GenBank上公布的鸡传染性贫血病毒VP1的基因序列设计一系列引物,通过基因扩增得到了鸡传染性贫血病毒(CAV)VP1基因的全长片段和一系列不同N末端截断的VP1基因片段,分别将这些片段插入表达质粒载体pET28a的多克隆位点上,构建成4种重组表达工程菌(E.coli BL21/pET-28-CAVVP1、E.coli BL21/pET-28-CAVVP1Nd29、E.coli BL21/pET-28-CAV VP1Nd56、E.coli BL21/pET-28-CAV VP1Nd137),研究了4种不同长度VP1片段在重组大肠杆菌中的表达,并通过SDS-PAGE电泳筛选最佳表达方式。结果表明:E.coli BL21/pET-28-CAVVP1Nd29能表达分子质量为44ku的可溶性蛋白,E.coli BL21/pET-28-CAV VP1Nd56能表达分子质量为40ku的不可溶性蛋白,而在E.coli BL21/pET-28-CAV VP1和E.coli BL21/pET-28-CAV VP1Nd137的诱导表达产物中未见明显的表达蛋白出现。其中可溶性的CAV VP1Nd29蛋白将有可能用于研制CAV诊断抗原和亚单位疫苗研究。