山羊疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定与致病性

为了查明引起2013—2014年江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病的病因,通过采集发病羊场鼻拭子,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒形态结构观察和病毒核酸鉴定,分离到一株山羊疱疹病毒Ⅰ型(caprine herpesvirus 1,CpHV-1),命名为JSHA1405;并对其进行了致病性试验。分离鉴定结果表明:病料接种MDBK细胞后,盲传至第3代时产生明显细胞病变;电镜下可见直径约100nm有囊膜的病毒粒子;gB全基因测序表明其为CpHV-1,序列比对显示JSHA1405株与CpHV-1瑞士分离毒E/CH株相似性最高,为99.2%。致病性试验表明,JSHA1405分离株可导致山羊发热持续一周以上,体温最高可达41.8℃。山羊感染后临床症状明显,表现为精神沉郁、流浆液性或脓性鼻涕,可通过鼻腔/粪便排毒。山羊感染后第7天出现中和抗体,第28天达到最高。这是国内首次报道CpHV-1的分离鉴定及致病性,分离毒JSHA1405具有较强的致病性,为CpHV-1病原学及防控技术研究提供依据与参考。     

4株高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离与鉴定

2007年7月从江苏某些猪场采集的具有明显高热症状的病料组织中分离出4株病毒,经对病毒的TCID50测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确认这4株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒.病毒基因序列分析发现:4株病毒的NSP2基因均存在2处共30个氨基酸缺失,缺失氨基酸分别位于481位、532～560位.氨基酸序列同源性分析可见:分离株与VR2332株、MLV株的同源性很低,在60.3%至68.6%之间;与国内疫苗株CH-1a的同源性为83.1%～83.7%;与国内分离的变异株JXAI株、HUN4株、HB-1(sh)/2002株同源性很高,为91.2%～98.5%;同时4株分离株之间的同源性很高,为99.3%～100.0%.系统发育树表明:分离的4个毒株与JXAI毒株和HUN4株有较近的亲缘关系,与其他株的亲缘关系较远.动物回归试验表明,4株病毒均可以引起仔猪明显的临床高热症状.     

猪流行性腹泻病毒G2a变异株CH-HK-2021的分离鉴定及其遗传进化分析

【目的】明确猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株的遗传进化关系及变异株各亚型间的抗原性差异位点,为PEDV新型疫苗及诊断试剂盒的研发打下基础。【方法】将采集的3份PEDV阳性仔猪肠道组织样品接种至非洲绿猴肾细胞(Vero)上进行PEDV分离,分别采用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting、RT-PCR和电镜观察进行鉴定,通过TCID50测定病毒滴度及绘制病毒体外增殖动态曲线;将分离毒株基因组分成33段进行RT-PCR扩增,使用Lasergene中的SeqMan拼接序列,然后以MEGA 7.0进行遗传进化分析,并以Protean中的Jameson-Wolf算法进行抗原性分析。【结果】其中1份PEDV阳性仔猪肠道组织样品在Vero细胞上盲传至第6代时出现典型的细胞病变,将其命名为CH-HK-2021毒株;IFA和Western blotting鉴定结果表明CH-HK-2021毒株能与小鼠抗PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应,且RT-PCR能扩增获得预期的目的条带,证实分离毒株即为PEDV。CH-HK-2021毒株的直径在80～120 nm,且病毒粒子表面带有刺突样...     

边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48～60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10¹拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3～7 d的血液和淋巴结...     

脂肪细胞膜抗血清对猪胴体品质和肉品质的影响

将36头5周龄的断奶上海大白猪随机分成6组.对照组C1和C2、皮下免疫试验组S1和S2、腹腔免疫试验组A1和A2,每组6头猪.试验周期为11周和17周.试验组A1和A2腹腔注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,试验组S1和S2皮下注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,对照组C1和C2以相同剂量注射正常山羊血清.11周末和17周末屠宰结果显示:①各试验组猪板油重和背膘厚都显著低于对照组(P＜0.05);11周末,与对照组相比,试验组S1和A1中猪眼肌面积均显著升高;17周末,腹腔免疫组猪眼肌面积显著高于对照组(P＜0.05).②11周末,腹腔免疫组猪半腱肌和里脊、皮下免疫组猪背最长肌和里脊中脂肪含量均明显低于对照组(P＜0.05);17周末,与对照组相比,腹腔免疫组猪半腱肌中脂肪含量显著下降(P＜0.05).③11周末,腹腔免疫组猪背最长肌和里脊中蛋白质含量显著高于对照组(P＜0.05);17周末,各试验组背最长肌和里脊中蛋白质含量与腹腔免疫组半腱肌中蛋白质含量均显著高于对照组(P＜0.05).表明,山羊抗猪脂肪细胞膜被动免疫具有较好改善猪胴体品质和肉品质的作用.     

Ghrelin对大鼠胃蛋白酶和H+-K+-ATP酶活性的体外作用

从断奶大鼠中获得新鲜的胃粘膜,分离培养胃粘膜上皮细胞,培养30 h后,试验组换为分别含有1×10^-4、1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1μmol/L生长素（Ghrelin）的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定培养液中胃蛋白酶活性和细胞中H^＋-K^＋-ATPase活性。试验结果表明：1×10^-3μmol/L的Ghrelin可显著提高胃蛋白酶的活性（P〈0.05）,1×10^-4、1×10^-3和1×10^-2μmol/L的Ghrelin显著提高胃黏膜上皮细胞中H^＋-K^＋-ATPase的活性（P〈0.05）。表明Ghrelin体外作用于胃粘膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌。     

替米考星对猪肺炎支原体 最小抑制浓度的测定试验

本试验对国产的替米考星进行了体外抗支原体活性最小抑制浓度的测定，结果报道如下。     

无土栽培蔬菜根腐病的防治措施

由于无土栽培自身的生态系统特点，病害一旦侵入即迅速发展，尤其是一些水生病原苗会随营养液的循环扩散到所有植株上，引发根部病害，成为无土栽培蔬菜的突出问题，由腐霉菌引起的根腐病尤为难治。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.