柑橘黄化脉明病毒一步法RT-qPCR检测体系的建立及应用

正柑橘黄脉病是由柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的一种新发病害,对柑橘产业尤其是柠檬产业危害较重。我国于2009年首次在云南省瑞丽市发现该病,四川、重庆、江西等省市也陆续发现并呈快速传播趋势。CYVCV检测方法包括指示植物鉴定、酶联免疫吸附法、直接组织点免疫法(宾羽等,2015)、RT-PCR(陈洪明等,2015)、逆转录环介导等温核酸扩增法(刘     

8种柑橘类植物对柑橘碎叶病毒分子组成的影响

探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,以及序列比较。结果表明HH和XLB与其各自在不同柑橘植株上的亚分离株的CP/Hinf I RFLP酶切图谱无明显差异;混合侵染的CTLV分离株HH和其亚分离株之间的SSCP谱型存在差异,株系构成单一的CTLV分离株XLB与其亚分离株间的SSCP谱型差异不明显。通过序列分析进一步证实CTLV在不同寄主上其CP基因有几个核苷酸位点发生了变异。CTLV可能受寄主植物的影响发生了变异。     

柑桔衰退病毒在3种寄主不同组织中分布的研究初报

应用直接组织点免疫(DTBIA)和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),对接种了柑桔衰退病毒(CTV)的3组共45株锦橙、凤凰柚和木并柑进行了检测,结果表明,CTV在嫩枝中的检出率最高,其次依次是嫩叶、老枝和老叶。     

柑桔碎叶病的检测及其防治

阐述了柑桔碎叶病在田间的表现症状以及利用生物学、血清学和分子生物学技术检测该病的方法;简要介绍了该病的防治措施.     

柑橘茎尖嫁接脱毒技术研究进展

柑橘茎尖嫁接技术是脱除其病毒和类病毒获得无病毒植株最常用且最有效的技术。围绕茎尖嫁接技术成活率和脱毒率的研究进行了阐述,以期为柑橘无病毒苗木的生产提供参考。     

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter\|leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd 和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田间侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3 %、17.9 %、10.7 %和28.6 %,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。     

应用PCR技术快速检测柑桔溃疡病的研究

应用PCR检测柑桔溃疡病，所用引物为5′TTGGTG TCGTCGCTTGTAT 3′和5′CACGGGTGCAAAAAATCT 3′。从病样的叶片、果皮和枝皮抽提溃疡病菌核酸进行PCR扩增，其产物经琼脂糖凝胶电泳，产生大约220bp的特征条带，与纯培养溃疡病菌的PCR产物一致。试验比较两种核酸抽提方法，微量快速抽提法的灵敏度明显高于高盐抽提法。有症状病样品的不同部位均能检测到溃疡病；病株的无症状叶片、果皮、枝皮有部分检测到病菌。病果园健康植株大多数检测不到病菌，少数植株PCR产物电泳条带较弱。取样量以10～20mg为宜。该PCR技术可用于快速检测柑桔溃疡病。     

利用一步法RT-PCR检测柑橘裂皮病类病毒

 柑橘裂皮病(CEVd) 是限制柑橘产量的一种重要类病毒病害, 国内外已经建立了多种方法检测该病害的病原。本研究初步建立了快速灵敏检测CEVd的一步法RT-PCR技术。经过与生物学鉴定和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(sPAGE) 方法的比较检测, 表明该RT-PCR方法检测周期短, 灵敏度高, 有利于对类病毒在春季和冬季浓度低时进行快速准确的检测。应用该技术对大量田间寄主进行了检测。     

柑桔衰退病毒分离株分子特征初步研究

柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑桔产区,迄今已经摧毁了一亿株柑桔,目前仍然严重威胁着以酸橙作砧木的柑桔产区和对茎陷点型CTV敏感的葡萄柚、柚类和某些甜橙的安全。我国广泛分布着CTV的多种强毒株,随着近年来柑桔产业结构调整的深入,茎陷点型CTV对柚类和某些甜橙的危害正变得日益严峻。国外的经验表明,弱毒株交叉保护(MSCP) 是目前防治茎陷点型CTV最有效手段。 CTV属于长线形病毒属(Closterovirus),基因组为19 296个核苷酸组成的正义单链RNA,具有 12个开放读码框(ORF),可以编码17种蛋白质, 其中25 kDa和27 kDa外壳蛋白分别包裹着约     

毒源和寄主对褐色桔蚜传播柑桔衰退病毒效率的影响

褐色桔蚜是柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)最有效的传播媒介,为了解不同柑桔寄主种类和毒源对褐色桔蚜传播CTV效率的影响,检测在以锦橙、凤凰柚和墨西哥来檬作毒源植株时,褐色桔蚜对10个CTV分离株的单蚜传毒率,以及蚜传前后CTV分离株p25/HinfⅠRFLP组群构成的变化,并对其中5个分离株与2个国外分离株进行了p20和p25基因相应氨基酸序列的比对分析。结果表明:褐色桔蚜传播CTV的能力受柑桔寄主种类的影响较大,以锦橙作毒源植株可以获得最高的传毒率;CTV毒株强弱以及褐色桔蚜虫态(有翅或无翅蚜)对单蚜传毒率影响不明显;褐色桔蚜传播具有p25/HinfⅠRFLP第3组群构成的CTV分离株的能力较强。