红薯过氧化物酶的纯化与性质测定

以红薯块根为材料,对红薯中的过氧化物酶进行提取、分离、纯化并测定其性质。结果表明:经40%～80%饱和度的硫酸铵分级分离、Sephadex G-100凝胶过滤、Concanavalin A亲和层析三个步骤,获得纯化的红薯过氧化物酶,酶纯化倍数为26.56倍,回收率0.92%,比活性3841.80 U/mg,SDS-PAGE电泳显示酶分子量为23 kDa。红薯过氧化物酶以愈创木酚为底物时λmax=470 nm,Km=3.031 mmol/L,酶的最适pH值为5.0,最适温度是35℃。酶的热稳定性较高,60℃保温20 min,残存相对活性为72.40%;酶的低温贮存稳定性很高,0～4℃冰箱中贮存20 d后,残存相对活性为97.28%。     

阴离子交换树脂纯化甘薯POD及其酶学性质研究

为得到高纯度的POD,采用阴离子交换树脂High-Q对红薯POD的粗酶结晶进行纯化并对其进行酶学性质初步研究.结果表明,粗酶结晶经过单步阴离子交换层析后达到电泳纯,SDS-PAGE检测结果为单条带,回收率为8.69％,纯化倍数为2.14;以愈创木酚为底物的Km值为0.62 mmol/L,最适pH值为4.0,最适温度为45℃;60℃保温25 min后残存活性为71.27％,0～4℃贮存15 d后残存活性为84.84％.该方法优于传统的亲和层析法纯化红薯POD.