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通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。 相似文献
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为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高. 相似文献
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胃肠道恶性肿瘤中Runx3基因甲基化研究 总被引:2,自引:2,他引:0
目的:通过检测胃肠道恶性肿瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃肠道恶性肿瘤中发生和发展过程中的意义。方法:采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对9种胃癌细胞系和11种结直肠癌细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测Runx3mRNA的表达情况。结果:在7种胃癌细胞系和6种结直肠癌细胞系中,Runx3基因启动子区域过度甲基化;RT—PCR结果显示,在20种胃肠道恶性肿瘤细胞系中有15种细胞系Runx3基因未表达。结论:Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃肠道恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为胃肠道恶性肿瘤早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。 相似文献
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正痘病毒属病毒的A33和H3L蛋白是其成员共有的中和抗体的两个主要靶标。为检测鼠痘病毒(ectromelia virus, ECTV)A33和H3L蛋白同源物的免疫原性及抗体中和活性,以ECTV-Moscow株基因组DNA为模板,PCR扩增A33和H3L同源基因EVM135、EVM085目的序列,分别构建pET30a-EVM135、pET30-EVM085原核表达载体,转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,利用镍层析柱纯化并进行逐步透析复性,免疫兔制备多克隆抗体。建立间接ELISA方法测定其抗体效价分别达1∶120 000和1∶360 000,Western blot和IFA证实该多克隆抗体具有良好的特异性和反应性;ECTV病毒中和试验表明抗EVM135多克隆抗体中和效价为1∶16,而抗EVM085多克隆抗体效价为1∶128。本研究通过高效表达EVM135和EVM085蛋白,并分析其免疫原性及抗体中和活性,为深入研究痘病毒致病和免疫机理,进而快速建立其诊断方法,为猴痘防控技术措施的研究奠定基础。 相似文献
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现年55岁的刘跃钧是浙江省丽水市华东药用植物园科研管理负责人、正高级工程师.他用十多年的心血,在全国率先探明了多花黄精栽培区域环境条件和根茎生长发芽规律,优选出林下多花黄精理想的复合经营模式,换来了黄精种植"从0到1"的艰难跨越.如今,多花黄精在丽水遍地生根,总产值已超3亿元.他也因此获得多项省部级科研成果奖,并荣获2... 相似文献
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南京夫子庙花卉市场生意兴隆,丈余宽的小巷摆满了色彩各异的花卉,赏花、卖花、买花的熙熙攘攘,热闹非凡。在两个东北花商摊前,招来众多君子兰爱好者。一个工人模样的中年人相中了一株“短叶和尚”,7—9个叶片,以一张“大团结”成交。这里脱手最快的是棕竹、苏铁、茉莉、山茶。南通的雀舌松刚刚 相似文献
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通过参与式访谈和二手资料收集,于2016年5月对龙泉市上垟镇竹林生产经营类型、农户年龄特征及当前经营技术进行了调查。结果表明:该区竹林经营模式以材用林为主,经营效益达到2.07万元/hm2;62.60%的农户年龄超过50岁,竹林经营劳动力严重不足;竹林集约化经营程度和林地生产力均较低;65.86%的农户缺乏竹林经营技术,65.61%的农户愿意采用冬笋覆盖技术,农户对新技术和高效经营有很强的期望和参与意向。针对农户竹林经营现状,提出了毛竹林高效培育的关键技术措施。 相似文献