大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。     

中药复方对雏鸭感染沙门氏菌药效学试验

研究以白头翁为主药的复方制剂的体外抑菌效果及对人工感染沙门氏菌雏鸭的治疗效果。体外抑菌试验中,复方制剂4的抑菌圈直径最大,达到17.6 mm,最低抑菌浓度为166.7 mg/mL,明显高于其它各组,说明沙门氏菌对制剂高度敏感;体内抑菌试验结果显示,高剂量组的治疗效果最好,保护率可以达到80%,与头孢噻呋组接近,体质量增加890 g,与阴性对照组基本一致。攻毒后,雏鸡血液中的红细胞数量显著降低、白细胞数量显著升高(P≤0.01),给予中药治疗后9~12 d,红细胞数量、白细胞数量恢复或接近正常水平,说明以白头翁为君药的复方制剂4对雏鸭沙门氏菌病有良好的治疗效果。     

一例乳兔葡萄球菌病的诊治

无菌采取病死兔的心、肝、脾、肺、肾病料,进行细菌的常规分离培养与鉴定。结果分离出葡萄球菌,结合对流行病学资料的分析、临床症状、病理变化和实验室诊断,确诊为母乳中含有葡萄球菌。     

禽腺联病毒的分离及其基因组鉴定

为了获得用于重组载体构建的禽腺联病毒(AAAV),用无菌处理后的鸡粪便样品与鸡胚致死孤儿病毒同时接种SPF鸡胚,根据已发表的AAAV基因序列设计引物,用PCR对致死鸡胚的尿囊液进行检测,结果从1份样品接种的鸡胚尿囊液中扩增到预期大小的AAAV Rep和Cap基因片段;对纯化后的PCR产物进行序列测定,将所获序列与已发表的AAAV Rep和Cap基因进行比较,其核苷酸序列同源性分别为97．1％和94．6％;将PCR检测阳性的尿囊液进行鸡胚传代,用PCR对不同时间死亡鸡胚的尿囊液进行再次检测,结果均扩增到预期大小的基因片段;提取病毒核酸,电泳观察到约4．7kb的AAAV基因组。说明已成功地从鸡粪便样品中分离到1株AAAV,为重组AAAV载体的构建打下了基础。     

牛胰腺核糖核酸酶A的基因克隆、表达及初步鉴定

【目的】为了避免在制备基因治疗或基因免疫的质粒时使用动物源性的核糖核酸酶A（RNase A）。【方法】提取牛胰腺总RNA，利用RT-PCR扩增出牛核糖核酸酶A cDNA，RT-PCR产物克隆到pGEM-T载体测序验证后，将此cDNA亚克隆到大肠杆菌分泌型表达载体pEZZ18中。【结果】SDS-PAGE电泳显示其转化菌经温度诱导后能表达预计的大小为28 kD重组蛋白。用渗透法释放出表达产物，将其加入到经碱裂解粗提的质粒DNA中并孵育0.5 h，琼脂糖凝胶结果表明表达产物能很好地去除细菌的RNA并且不降解超螺旋质粒DNA。【结论】在质粒的纯化过程中，重组牛核糖核酸酶可以替代动物源性的RNase A。     

一例曲霉菌的鉴别诊断及治疗

禽曲霉菌病是一种常见的霉菌病，多种禽类均能感染，主要以1月龄的幼禽最易感，4～15日龄是流行的高峰，常呈急性暴发，成年禽为慢性和散发性。其主要特征是肺、气囊发生广泛炎症，故又称曲霉菌性肺炎。2009年4月，我市某肉鸡场发生一起以体表点状出血、轻微呼吸症状、低发病率、低死亡率的传染病，根据流行病学调查、病理剖解和实验室检查，诊断为黄曲霉菌病。     

F18ac菌毛A亚单位基因的克隆与序列分析

根据已经发表的F18ab菌毛A亚单位(FedA/ab)的基因(fedA/ab)[1],设计一对引物,利用PCR技术从表达F18ac菌毛的大肠杆菌2134P株[2]、8199株[3]、8813株[3]中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒T2134PA、T8199A、T8813A.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该3个序列大小均为516bp,与fedA/ab(513bp)具有较高的同源性,分别为96.3%、96.5%、95.9%,推导的Fed/ac氨基酸序列与FedA/ab同源性分别为93.0%、93.6%、92.4%.数据表明该实验所克隆的序列均为F18ac菌毛A亚单位(FedA/ac)的基因(fedA/ac).     

防治奶牛乳房炎的基因工程新药

奶牛乳房炎是世界范围内发生最普遍、防治最难、花费最多的奶牛疾病之一，对奶牛业的危害主要是发生率高．奶产量降低和医药费用增加。目前奶牛乳房炎主要用抗生素防治，虽有一定的效果，但也日益暴露出耐药菌株和抗生素残留等危害人类健康的严重问题，特别是在我国，由于抗生素的长期、大量和盲目使用，治疗奶牛乳房炎无效的病例越来越多，从而给奶牛业造成了很大的经济损失。扬州大学江苏省转基因动物制药工程研究中心将基因治疗原理与溶菌酶的广谱抗菌作用相结合，研制出能取代抗生素防治奶牛乳房炎的基因工程新药，并已获得国家发明专利（专利号：ZL02148545．3），目前处于安全评价的中间阶段，现介绍如下。     

阿(伊)维菌素类驱虫药物给药方法的应用

阿维菌素类药物抗虫谱极广,在临床中共有3纲12目73属的寄生虫对其敏感,自获准注册以来,世界上有60多个国家被批准可将其用于人、牛、马、羊、猪、犬和其他哺乳动物寄生虫病的防治.