马铃薯甲虫病原细菌分离及生防菌的筛选与鉴定

【目的】分离筛选对马铃薯甲虫（Colorado potato beetle,CPB）具强致病性的细菌生防菌株并对其鉴定。【方法】从CPB虫体上分离病原细菌,利用几丁质酶和蛋白酶活性初步筛选致病菌株,然后通过室内和田间试验筛选出可导致CPB大量死亡的生防菌。根据形态学、生理生化特性和16S rDNA序列分析等进行鉴定,确定生防菌株的分类学地位。【结果】从新疆CPB分布区采集的CPB发病成虫虫体上分离纯化获得126个细菌菌株,其中36个菌株对昆虫体壁几丁质和蛋白质具有降解活性。在室内马铃薯叶片饲养的CPB各龄幼虫和成虫上测试,11个菌株对1-2龄幼虫表现出不同程度致病力,在接种后1-3 d始见幼虫死亡,处理后7 d幼虫的累积死亡率达到21.0%-77.9%,所有菌株对2龄以上CPB的致病力不明显或无致病力。在田间种植的马铃薯植株上测试这11个致病菌株,处理后观察,CPB008、CPB012和CPB016等3个菌株在10 d内对CPB的累积致死率达到41.0%-49.9%;另外还有3个菌株对CPB的致死率也在21.1%以上。这6个菌株均为革兰氏阳性菌,从形态学和生理生化特性鉴定它们均属于芽孢杆菌（Bacillus）,通过PCR扩增分别获得它们的16S rDNA序列并登录到NCBI GenBank中,由此分析比对,菌株CPB008、CPB012、CPB016和CPB111为苏云金芽孢杆菌（B. thuringiensis）;CPB072、 CPB108为萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）。【结论】筛选获得的3株苏云金芽孢杆菌（CPB008、 CPB012、CPB016）对马铃薯甲虫致病性强,具有重要的应用潜力。