自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用, 取正常妊娠(6W～11W)人工流产子宫蜕膜组织30例, 自然流产蜕膜组织30例, 利用RT-PCR, 原位杂交, 免疫组织化学, 蛋白印迹, 免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测. 结果表明: STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势, 但差异无统计学意义(p＞0.05), 流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组(p＜0.05). 说明在自然流产子宫蜕膜组织中, STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入, 这可能是诱发流产的原因之一.     

家蚕微卫星标记的荧光原位杂交研究

家蚕既是重要的农业经济昆虫,又是遗传学研究常用的实验动物和现代分子生物学研究的良好材料. 目前已有多种分子标记被用于家蚕遗传连锁图的构建, 但人们对这些分子标记在染色体上的物理定位仍知之甚少. 该文以微卫星(SSR03)序列为探针, 对家蚕染色体进行荧光原位杂交, 在减数分裂的间期、粗线期、中期染色体上都观察到单一荧光信号, 表明该序列为单一序列微卫星遗传标记. 利用Image J 软件测算杂交信号在该染色体上位置, 信号位点距离近端的相对长度与该染色体相对长度比值为12.502±0.470. SSR03可作为家蚕染色体物理图的遗传标记.     

小鼠胚泡着床期LongSAGE文库中双标签的制备研究

研究探讨小鼠胚胎着床期LongSAGE文库构建过程中总RNA提取、cDNA合成及双标签(D itags)制备方法,优化PCR扩增中双标签PCR的最佳模板稀释度及扩增循环次数。     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色．PDQuest2DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱。从总体看,14,16,18d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12d和13d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失。以18d的胎肝图谱为参考,14,16d与其匹配率分别为57％,61％,成鼠与其匹配率为69％。与18d胎肝图谱相比,14d表达上调3倍以上的点有27个,16d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个。并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3C多肽4、TBC1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO。研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用。     

家蚕晚期胚胎原代细胞分化和转分化的研究

对家蚕晚期胚胎组织进行原代培养,记录了培养过程中出现的多种分化和转分化现象。发现已分化的晚期胚胎组织、细胞尚可继续分化和转分化形成各种不同类型的组织与细胞,而且这些细胞多有一定的增殖能力,暗示了家蚕晚期胚胎组织可能有多种内部器官组织的多能干细胞存在。     

小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织细胞蛋白质组研究

利用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离妊娠第3天(3 d)、第5天(5 d)、第7天(7 d)小鼠子宫内膜的总蛋白质;考马斯亮蓝染色、PDQuest 2DE软件分析获得3个不同孕期的蛋白质表达谱;图像分析以5 d的图谱为参考,3 d、7 d与其匹配率分别为68%、61%.在等电点PI 3～10、分子量14.4 KDa～116.0 KDa范围内分离得3 d、5 d、7 d小鼠子宫内膜蛋白点大约分别为713个、736个、673个.选取差异蛋白质点进行MEDLI-TOF质谱分析.查询数据库,获取有意义的蛋白点,分别为载脂蛋白A-I、膜联蛋白A1、谷光甘肽转移酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、烯醇化酶.研究结果表明,在胚泡植入窗口期(5 d),小鼠子宫内膜合成蛋白质的种类和数量明显增加,以适应胚泡植入.子宫内膜表达的蛋白质在调控子宫基质降解和子宫内膜的局部免疫反应方面中扮演着重要角色.     

不明原因复发性自然流产胚胎绒毛组织MiRNAs的表达研究

利用miRCURY LNATM microRNA Arrays 10.0对不明原因复发性自然流产胚胎绒毛和正常胚胎绒毛组织miRNAs进行了检测.结果显示流产绒毛和正常绒毛组织有43个miRNAs存在明显表达差异(ratios≥2.O或ratios≤0.5).其中上调表达33个,下调表达10个.文献检索显示有12个差异表达miRNAs(上调10个,下调2个)已有功能研究报道,主要与细胞侵袭、离子转运和信号转导相关,另外31个尚无功能研究报道.该研究结果提示自然流产绒毛组织中某些差异表达的miRNAs可能与不明原因复发性自然流产的发生有关.     

小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织细胞蛋白质组研究

利用固相pH梯度双向凝胶电泳（2D-PAGE）分别分离妊娠第3天（3 d）、第5天（5 d）、第7天（7 d）小鼠子宫内膜的总蛋白质;考马斯亮蓝染色、PDQuest 2DE软件分析获得3个不同孕期的蛋白质表达谱;图像分析以5 d的图谱为参考,3 d、7 d与其匹配率分别为68%、61%.在等电点PI 3-10、分子量14.4 KDa-116.0 KDa范围内分离得3 d、5 d、7 d小鼠子宫内膜蛋白点大约分别为713个、736个、673个.选取差异蛋白质点进行MEDLI-TOF质谱分析,查询数据库,获取有意义的蛋白点,分别为载脂蛋白A-I、膜联蛋白A1、谷光甘肽转移酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、烯醇化酶.研究结果表明,在胚泡植入窗口期（5 d）,小鼠子宫内膜合成蛋白质的种类和数量明显增加,以适应胚泡植入.子宫内膜表达的蛋白质在调控子宫基质降解和子宫内膜的局部免疫反应方面中扮演着重要角色.     

小鼠胚胎发育不同阶段肝脏差异蛋白质组分析

利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离胎龄12,13,14,16,18 d的胎鼠及成鼠肝脏总蛋白,考染显色,PDQuest 2 DE软件分析获得6个不同发育时期的蛋白质表达谱.从总体看,14,16,18 d胎鼠与成鼠肝脏的蛋白质表达谱较为一致,而12 d和13 d的肝脏蛋白质表达谱则与它们有较明显的差异,其蛋白质表达量显著降低,许多蛋白甚至缺失.以18 d的胎肝图谱为参考,14,16 d与其匹配率分别为57%,61%,成鼠与其匹配率为69%.与18 d胎肝图谱相比,14 d表达上调3倍以上的点有27个,16 d表达上调3倍以上的点有13个,成鼠表达上调3倍以上的点有15个.并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对14个差异蛋白质进行分析鉴定,经数据库查询,其中6个蛋白点获得了有意义的结果,分别为细胞周期依赖激酶调节亚基1、凡科尼蛋白、酪氨酸蛋白激酶BLK、通用转录因子3 C多肽4、TBC 1家族因子13、巨噬细胞受体MARCO.研究结果表明,在小鼠胚胎发育过程中,肝脏合成蛋白的种类和数量均迅速增加,并且细胞的增殖和生长、免疫功能的发育和完善以及蛋白质与核酸的合成和运输在其胎肝发育过程中起着非常重要的作用.     

ADRB3基因Trp64Arg多态性与日本民族原发性高血压无关

目的:研究高血压候选基因β3肾上腺素能受体基因β3-Adrenergic receptor(ADRB3)在日本人群的分布,并探讨ADRB3基因Trp64Arg多态性与原发性高血压病(essential hypertension,EH)的关系.方法:采用流行病学调查方法分析肥胖指数、血浆胆固醇和甘油三酯等临床指标,同时调查受检者吸烟和饮酒等生活习惯;Taqman-PCR法分析ADRB3基因Trp64Arg多态性在大样本日本人群(样本总数2 714人,其中HT组1 328例,非高血压组(NT)1 386例)的分布及其与临床指标间的相关性.结果:除总胆固醇外,其余指标如年龄、性别、肥胖指数、舒张期血压、收缩期血压、HDL-脂蛋白和甘油三酯等在Trp/Trp、Trp/Arg和Arg/Arg这3类基因型携带者中均无显著性差异;卡方检验结果显示ADRB3的Trp64Arg基因型(p=0.425)与等位基因频率(p=0.501)在HT与NT之间没有显著统计学意义;ADRB3的Trp64Arg基因多态性与高血压病Logistic回归模型分析结果显示,卡方值(wald)为0.356;比值比为0.884;95%的可信区间为0.589～1.326,p值为0.551.结论:按照p＜0.05统计学标准,ADRB3的Trp64Arg多态性可能与日本人群EH无关.

Abstract：

To investigate the correlation between Trp64Arg polymorphism in β3-adrenergic gene and essential hypertension (EH) in large scale Japanese, a case-control study consisting of 1 328 essential hypertensive subjects (HT) and 1 386 normotensive controls (NT) was performed. All subjects were urban residents randomly selected from the Ehime Prefecture of Japan. Body mass index (BMI) was recorded in the epidemiological investigation process, some biochemical indicators (HDL, LDL, triglyceride and cholesterol) were measured from the blood plasma of the subjects. Meanwhile, we investigated some life-style factors of the subjects, including smoking and alcohol use. The ADRB3 Trp64Arg polymorphisms were determined in DNA extracted from peripheral blood leukocytes by Taqman-polymerase chain reaction (Taqman-PCR). Except total cholesterol, the other indicators studied (age, sex, BMI, SBP, DBP and HDL)did not differ significantly among the Trp/Trp, Trp/Arg and Arg/Arg genotype carriers. Chi-square anal ysis showed no statistically significant differences in either genotype distribution (p=0. 425) or allele frequencies (p=0. 501) between hypertensive and normotensive subjects. The logistic regression model results demonstrated that there were no association between ADRB3 gene Trp64Arg polymorphisms and hypertension subjects, and Wald=0. 356, Odd=0.884, 95%CI was 0.589-1.326, and p=0.551. Therefore, the present study suggests that the ADRB3 gene Trp64Arg polymorphisms might not be significantly associated with hypertension in homogeneous Japanese.