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为了建立一种敏感、特异的牛冠状病毒(BCoV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,试验利用GenBank中BCoV参考毒株N基因序列,设计引物及小沟结合物(MGB)探针,建立实时荧光定量RT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏度和稳定性进行检验。利用建立的方法对采集自7个省份31个发病牛场的925份临床样本进行检测,并用基于BCoV N基因的普通RT-PCR结合测序的方法对部分阳性样品进行验证。结果表明:建立的实时荧光定量RT-PCR方法的扩增体系为上下游引物(10μmol/L)各1μL,探针(10μmol/L)0.8μL,2×One Step RT-PCR BufferⅢ10μL,Ex Taq HS (5 U/μL) 0.4μL,Prime Script RT Enzyme MixⅡ0.4μL,总RNA 2μL,ddH2O 4.4μL;扩增程序为,42℃5 min; 95℃10 s; 95℃5 s, 55℃35 s, 40个循环。标准曲线方程为y=40.979-3.512x,可信度(R2)为0.999,扩增效率(E)为92.6%,最低检测限为4... 相似文献
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藜科植物S.L多糖抗病毒作用机理初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对从藜科植物中提取的、具有诱导抗病毒作用的S.L多糖的作用机理做了初步的研究。首先将S.L多糖抽提液喷施烟草,探究S.L多糖诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)产生抗性的最佳时间。结果表明,用S.L多糖诱导植株产生的抗性在5 d左右达到最大,5 d之后抗病性随着时间的推移而减弱。在接种病毒前用S.L多糖对烟草幼苗进行喷施,然后于接种当天及接种后不同时间对各处理的同位等量叶片测定在总蛋白含量、过氧化物酶活性及同工酶图谱上的差异。研究发现,各处理的总蛋白含量均有所增加,且高于对照,并都于接种后的第9 d达到最大值。各处理的过氧化物酶活性在接种病毒初期均高于对照,但5 d后对照的酶活性超过处理,高峰较处理提前到来,且峰值略大于处理。在同工酶谱上,病毒接种后5 d,处理的酶带比对照浓且多了1条。5 d之后,二者的酶谱变得基本相同。到接种后10 d测定,结果相反,对照比处理的酶带浓。 相似文献
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为建立一种快速、准确、常规的猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)检测方法,根据PHEV N蛋白基因序列,设计1对引物和1条探针,建立了PHEV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法特异性好,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;用阳性质粒Puc57-PHEVn评估其敏感性,发现检测下限达10~(-6) ng/μL(224拷贝/μL)。采集233份发病猪组织样品进行临床检测,发现该方法与巢式RT-PCR的符合率达98.3%,准确筛查出巢式RT-PCR并测序阳性的样品14份,且检出率高于巢式RT-PCR。结果表明,本方法敏感、特异,可用于PHEV临床样品的检测。 相似文献
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宁夏农民的消费水平还较低,消费结构中存在不少的问题。研究我区农民家庭消费结构,可以了解它们变化的规律性,促进产业结构的调整。同时,经过分析,提出提高我区农民消费水平的策略、为农民致富奔小康打下基础。 相似文献
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本文全面介绍了MERS的疾病概况、人间及动物间流行情况,目前该病已经蔓延到全球25个国家,造成1300余人感染、近500人死亡,并有4个国家发现骆驼MERS病例;总结了世界卫生组织(WHO)、世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)等采取的防控措施,并从病毒来源、能否人际间传播、有效疫苗和药物研制等3个方面对MERS的研究进展进行了概述。目前认为,人类MERS的传染源可能是骆驼, MERS-CoV仅发生了有限的人传人,还没有研制出有效的特异性疫苗和药物。本文还简述了我国的防控情况,并提出了相关防控建议。 相似文献
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完善有效的法规体系,是美、欧、澳根除牛结核病等动物疫病的基础保障。其要点主要包括:健全法律制度,强化财政支持,减少利益方抵触行为;规范检测方法,对屠宰牛进行全部检疫;对阳性牛实施严格追溯制度,并分类实施标识制度;建立病牛扑杀的基本标准,选择性采取扑杀措施;推行区域化管理制度,建立差异性市场准入标准;实施野生动物隔离及监测制度,防止野生动物向家养动物传播疫情;强化利益方的宣传教育,营建群防群控氛围。这些策略和措施,对我国健全结核病防治策略具有一定借鉴意义。 相似文献