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利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化 总被引:1,自引:0,他引:1
建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性。通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达。结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90%以上。成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性。MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达。该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料。 相似文献
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从炒房到炒煤,温州人的一举一动成了民间投资的风向标. 在调查中,大家对温州人的看法基本相似:读书不多,但对于圈子内的人倍加信任.也许正是这个特点使得他们虽在诸多投资领域知之甚少,却能在某位带头人的引领下,迅速形成合力,把财富席卷囊中. 相似文献
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鲑鳟类养殖常见疾病及预防 总被引:1,自引:0,他引:1
鲑鳟类是世界性的主要冷水养殖鱼类,鱼病的防治在鲑鳟养殖生产中十分重要,尤其是高密度饲养时,更容易发生鱼病。加强鱼病防治,尽量减少鱼病造成的损失,是提高鲑鳟养殖成活率和增加经济效益的重要措施之一。 相似文献
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【目的】克隆骆驼补体C3d基因,分析序列特征,为其佐剂效应研究提供依据。【方法】利用Trizol试剂,从骆驼肝脏组织提取总RNA,并反转录获得cDNA。设计C3d特异引物,应用PCR技术扩增C3d序列,构建到pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态菌株并双酶切鉴定。使用ClustW,DNAstar, Swiss-Model软件对构建的重组C3d基因序列进行同源性比对,建立系统进化树并对其二级和三级结构进行预测和分析。【结果】采用骆驼C3d特异引物,PCR扩增获得大小为909 bp的骆驼补体C3d基因。构建至T载体并转入大肠杆菌,获得阳性转化克隆。克隆的新疆双峰驼C3d序列与骆驼科C3d基因之间的同源性在97%以上,与牛和猪C3d基因同源性为88%,与兔和人的C3d基因同源性为83%。对骆驼C3d蛋白采用Swiss-Model软件进行序列分析,预测该蛋白质的二级结构主要由α-螺旋和β-折叠组成,该蛋白可能具有良好的免疫原性和免疫结合活性。【结论】C3d基因在进化中较为保守,在骆驼免疫中可以采用亲缘关系较近的其他动物来源的C3d作为分子佐剂从而增强骆驼免疫效果。 相似文献
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[目的]研究盐胁迫对银柴胡药材产量和活性成分相对含量及积累量的影响,以明确盐胁迫对银柴胡药材产量和质量的影响效应,为银柴胡的规范化栽培提供理论依据。[方法]盆栽控盐试验栽培柴胡一年生幼苗,土壤盐含量设置为2、3、4 g/kg 3个水平;利用紫外分光光度法测定银柴胡药材中总黄酮和总皂苷的相对含量,并结合产量计算其积累量。[结果]随着土壤中NaCl含量的增加,银柴胡药材产量呈现逐渐下降的趋势;药材中总黄酮和总皂苷相对含量呈现逐渐升高的趋势,而其积累量呈先升高后降低的趋势。[结论]盐胁迫显著提高银柴胡药材产量、总黄酮和总皂苷的含量,当土壤盐含量为3 g/kg时,银柴胡药材总黄酮和总皂苷积累量均较高,有利于银柴胡药材的优质高产栽培。 相似文献