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2.
马尾松银松素合酶基因启动子区的克隆及特征分析 总被引:1,自引:0,他引:1
银松素合酶(pinosylvin synthase,PS)是合成银松素类植物抗毒素的关键酶。本文根据前期工作所获得的PS基因序列,设计基因特异引物,利用连接介导的染色体步行技术,从马尾松总基因组中扩增PS基因上游的启动子区;通过PLAN-CARE等分析软件对5′侧翼区近700 bp进行启动子特征分析,预测启动子区调控元件。结果表明,在翻译起始密码子上游167 nt处可能存在TATA-box。此外还发现3个GATA-box(-260 nt、-295 nt、-386 nt和-295 nt)和若干个TGAC-like序列。 相似文献
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4.
福建柏总DNA的快速简便提取和鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
本文介绍了福建柏Fokieniahodginsii(Dunn)HenryetThomas总DNA的提取介质组成分 ,建立了一个快速、简便且高效提取和鉴定福建柏鲜叶、干叶、种子总DNA的方法。该方法所提DNA的产率分别为 :1 5 0~ 2 5 0 μg/g鲜叶 ,1 0 0~ 1 5 0 μg/g干叶和 1 4 0~ 1 6 0 μg/g种子 ;绝大多数粗提总DNAOD2 6 0 /OD2 80 =1 .80±0 .0 2 ;提取的鲜叶、种子和单种子胚乳总DNA皆为 4 8kb,而干叶总DNA为 5 0Kb ,都适于限制性酶切和RAPD反应 ;一般实验时间为 4h。该方法既不需氯化铯梯度离心和柱层析纯化 ,也不需氯仿 :异戊醇抽提 ,粗提的总DNA样品不经RNase消化即可用于RAPD反应或经RNase消化用于限制性酶切 ,因此 ,具有高产率、高纯度、高质量和快速简便等优点。尤其是它所提取的干叶DNA ,适于限制性酶切和PCR反应 ,解决了取材上的不便。实验中还发现 :( 1 )提取DNA之前去除叶绿素与否 ,对提取福建柏总DNA无明显影响。 ( 2 )只有去除RNA的福建柏总DNA样品 ,才能被限制性内切酶完全切开。 ( 3)RAPD模板中含RNA及一定量的蛋白质 ,均不影响扩增效果。 ( 4 )同一个体的鲜叶、干叶、种子总DNA样品 ,皆可得到完全一致的扩增产物。 相似文献
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花生DNA快速简便提取方法的研究 总被引:16,自引:4,他引:16
在花生新鲜针叶和干叶DNA提取过程中,应用pH值较低,无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质,其中加入2%的β-巯基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色。提取出的DNA样品产率在92.6~216.31ng/mg.fw,DNA质量和纯度较高,260nm/280nm光密度比值在1.8~1.9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切,并可用于随机引物PCR扩增。该方法为花生分子生物学研究提供基础。 相似文献
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9.
甘蔗果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶基因(F2KP)的克隆及其功能研究 总被引:1,自引:0,他引:1
果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/ fructose2,6-bisphosphatase,F2KP)是影响生物碳积累和分配的调控关键酶,同时也是一个具有激酶和酯酶两种催化活性的双功能酶.本研究在已获得甘蔗(Sacc harum officinarum)蔗叶F2KP(命名为SoF2KP-L)的基础上,以蔗茎cDNA为模板克隆获得不同长度的同源片段,分别命名为SoF2KP-S1、SoF2KP-S2和SoF2KP-S3.生物信息学分析结果显示,SoF2KP-L翻译的蛋白具有完整的激酶和酯酶结构域,SoF2KP-S1、SoF2KP-S2和SoF2KP-S3所含开放阅读框长度均小于SoF2KP-L,其中SoF2KP-S1翻译的蛋白只具残缺的激酶结构域;SoF2KP-S2翻译的蛋白具完整激酶结构域但缺失酯酶结构域;SoF2KP-S3只能翻译数个氨基酸即终止翻译.选择双功能域完整的SoF2KP-L构建表达载体,农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotiana tabacum).RT-PCR证实,SoF2KP-L在转基因植株成熟叶中转录表达.碳水化合物等生理指标测定结果表明,转基因植株成熟叶片中可溶性总糖/淀粉、还原糖/淀粉、蔗糖/淀粉比值均有不同程度的升高,碳水化合物含量和相关分配比率发生改变.研究结果提示,甘蔗中可能存存不同的F2KP转录产物,并初步证实甘蔗SoF2KP-L在光合组织中对蔗糖和淀粉的分配起到一定的调控作用,为进一步研究甘蔗F2KP基因的功能及为甘蔗分子育种提供参考依据. 相似文献
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