微卫星分子标记与松浦镜鲤3个表型性状的相关分析

本文利用SPSS13.0分析软件对194尾松浦镜鲤的体重、体长和尾长值进行相关分析,并选用扩增效果好的30个微卫星标记,检测新品种松浦镜鲤繁殖群体的有效等位基因数（Ne）、观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）等遗传参数,以卡方检验估计群体Hardy-Weinberg平衡,最后还将30个基因座的不同基因型与个体的体重、体长和尾长进行了相关分析。结果显示,体重与体长高度线性相关,差异极显著;尾长与体重、体长分别呈显著相关,差异显著。多样性指数结果表明共检测到172个等位基因,片段长度在115～432bp之间,有效等位基因数为1.14～5.32;观测杂合度为0.07～0.92,期望杂合度为0.13～0.91;多态信息含量为0.12～0.79,其中高度多态（PIC≥0.5）21个,中度多态（0.25≤PIC≤0.5）7个,表明这个群体的多样性较高,信息含量比较丰富。我们还发现有4个遗传位点：HLJ328、HLJ693、MFW29和MFW48与体长性状显著相关（P〈0.05）,其中,位点HLJ328、HLJ693和MFW48还与体重性状显著相关（P〈0.05）,未发现与尾长性状相关的位点。本文获得的这些标记具有生长特性优势,可作为松浦镜鲤分子辅助育种的参考标记。     

鲤鱼6个群体间MHCⅡB基因第3外显子的多态性分析

根据已克隆的鲤鱼MHC Ⅱ B基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR-SSCP方法对6个鲤鱼群体MHC Ⅱ B基因第3外显子108 bp扩增片段进行多态性分析,结果共获得7种基因型(A-G),其中基因型为B型的个体数占所有群体总个体数的47.45%,且分布于所有群体,其它6种基因型出现频率范围为1.1%~17.15%。回收不同基因型的片段并测序,经比对共发现4个碱基多态位点和3个氨基酸多态位点。易捕鲤和大头鲤两群体中各发现4个突变位点(占3.7%);松荷鲤、松浦鲤和德国镜鲤群体各发现3个突变位点(占2.7%);松浦镜鲤群体仅发现2个突变位点(占1.8%)。用Popgene软件计算每个群体不同位点的杂合度和多态信息含量(PIC),6个鲤鱼群体的观测杂合度(Ho)最大值为0.746 4,最小值为0.103 7;多态信息含量为0.062 3~0.360 9。该研究将为今后深入研究鲤鱼MHC基因多态性及与鲤鱼抗病新品种的选育提供理论依据。     

鲤鱼cDNA-AFLP技术反应体系的建立

将cDNA扩增片段长度多态性（cDNA-amplified fragment length polymorphism）技术应用在鲤鱼基因的转录表达研究中,本文通过对cDNA-AFLP主要步骤的优化和改进,建立起鲤鱼cDNA-AFLP反应体系。结果表明,采用MseⅠ和BstYⅠ酶切鲤鱼cDNA100ng,分别处理2h和3h后,以接头浓度分别为2pmol/μL和0.2pmol/μL、T4连接酶浓度为0.12U/μL的反应体系进行连接。以稀释50倍的预扩增产物为模板、BstYⅠ和MseⅠ比例为1：4的引物配比进行选择扩增可得到稳定的扩增结果。本研究建立的cDNA-AFLP技术将为鲤鱼转录组研究建立基础和技术支持。