排序方式： 共有1条查询结果，搜索用时 3 毫秒
1
1.
△FosB作为FosB的一种截短型,具有广泛的生物学功能,在脂、钙沉积和药物成瘾等方面有重要作用.本研究采用RNA干扰技术,通过制备重组干扰腺病毒对山羊(Caprar hircus)△FosB基因进行沉默,进一步研究山羊△FosB基因在脂、钙沉积方面的相关功能及作用机制.实验采用BLOCK-iT slaRNA腺病毒干扰系统,将预先设计好的寡聚shRNA-492/572经退火复性后克隆入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中.经干扰效率检测后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-572与病毒骨架质粒pAD/PL-DEST进行同源重组,获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-572,并转染HEK-293细胞,经包装、扩增后即可产生干扰腺病毒AD-△FosB-572,TCID50法测定其滴度为1.58x109 PFU/mL.用AD-△FosB-572感染山羊的乳腺上皮细胞(MOI=200),经Western blot及实时定量PCR检测证明在病毒感染24、48和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中△FosBmRNA表达量分别下调了45%,73%和81%,其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显,可用于后续的基因功能研究. 相似文献
1