牛体外受精技术的研究——单层细胞预培养时间对牛早期胚胎体外培养效果的影响

将2469枚经体外成熟、体外受精后获得的牛早期胚胎(2～8细胞阶段)随机放入7组不同日龄(分别预培养0～9天)的牛卵泡颗粒细胞单层细胞滴中进行“复合”培养,然后观察这些胚胎在体外培养条件下继续发育至囊胚和孵化囊胚阶段能力的差异。结果随单层细胞预培养时间的延长(0～4天内),牛早期胚胎的囊胚发育率、发育速度及囊胚胎孵化率均呈逐渐升高的趋势;尔后,培养效果又稍有下降。经统计学检验,各组间囊胚发育率(31.7～39.2%)和囊胚孵化率(61.1～72.6%)及7日龄囊胚发育比率(41.8～58.5%)均无显著差异(P>0.05)。这表明,利用不同预培养时间(0～6天)的颗粒细胞单层与牛早期胚胎“复合”培养,都同样具有促进胚胎在体外条件下发育到囊胚和孵化囊胚阶段的能力,但以使用预培养2～4天单层细胞进行“复合”培养效果较佳。     

聚乙二醇细胞融合技术在牛手工体细胞克隆中的应用初探

本研究分3个实验。实验1对比了不同浓度的离子霉素对牛去透明带卵母细胞孤雌激活的效果;实验2比较了手工半卵切割法去核与显微半卵切割法去核的效果;实验3对聚乙二醇（PEG）细胞融合技术在牛手工体细胞克隆的应用进行了初步探讨。结果表明,对于去透明带牛卵母细胞孤雌激活,离子霉素浓度为2．0μmol／L组的激活效果最好,其囊胚发育率（29．4％）极显著地高于浓度为5．0μmol／L的对照组和0．5μmol／L组（囊胚率分别为8．3％和9．4％,P〈0．01）;采用半卵切割法去核,手工切割的半卵存活率（85．6％）与显微操作（90．3％）差异不大,切割速率（约100枚卵／h）相仿。对双半卵与体细胞进行同步融合处理时,应用50％浓度的PEG融合率（39．3％）极显著好于45％、55％和60％的PEG（融合率分别为0％、16．2％和5．3％,P〈0．01）。     

现行牛IVF程序在水牛体外受精的应用研究

本研究对我所现行的牛体外受精程序 ( IVF)应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨。结果表明 ,水牛卵巢生长卵泡少 ,平均仅可回收 5枚卵母细胞 ,只相当于黄牛 ( 14.3个 )的1/ 3。水牛卵母细胞的体外成熟率为 51.7% ,体外受精卵裂率为 58.7% ,均极显著地低于黄牛(分别为 87.3%和 69.6% ,P<0 .0 1)。水牛卵母细胞经体外受精后 ,早期胚胎的体外发育速度较黄牛快 ,体外受精后的第 6d囊胚发育率占 36.4 % ,累计到第 7d时占 80 .7% ,极显著地高于黄牛 ( 57.6% ,P<0 .0 0 1)。水牛早期胚胎的体外囊胚发育率为 31.5% ,与黄牛的 ( 39.2 % )差异不显著 ;孵化囊胚率为 73.8% ,也与黄牛的相仿。实验结果表明 ,我所现行的牛 IVF程序应用于水牛的体外受精研究是有效、可行的 ,特别是早期胚胎的体外培养系统 ,已接近于黄牛的水平。但尚需设法提高水牛卵母细胞的体外成熟培养效果 ,以提高水牛体外受精的整体效率     

牛IVF性控切割胚胎和整胚的冷冻保存研究

本研究分3个实验对比了采用不同处理的常规冷冻和玻璃化冷冻保存358枚体外受精(IVF)性控切割囊胚和326枚整胚的保存效果。结果表明：(1)用于冷冻整胚的常规方法对冷冻性控切割胚胎同样有效；(2)利用含10％EG 10％FBS的DPBS冷冻牛IVF控切割胚胎或整胚的效果明显优于用含10％甘油 0.4%BSA或1．4mol／LEG 0．1％PVOH的DMPBS；(3)采用微玻管玻璃化冷冻保存牛IVF性控切割胚胎的效果显著优于常规冷冻法。     

牛胚胎移植技术的应用前景展望

1 胚胎移植的意义 胚胎移植(ET)技术对畜牧业的发展具有十分重大的意义. (1)通过胚胎移植可以充分发挥优良种畜的繁殖潜力,提高经济效益.     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌培养体系的建立和优化

试验系统探讨了猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活方法。结果表明:在成熟液中分别添加FSH(促卵泡素:0.1ng/mL)和hMG(人绝经期促性腺激素:0.01IU/mL)的卵母细胞成熟率差异显著,但2组间的分裂率和囊胚率差异不显著。在成熟液中添加0、10、30、50、70ng/mL或90ng/mL的EGF(表皮生长因子),50ng/mLEGF组的分裂率达到84.90%,囊胚率达到30.20%,显著高于其余各组。分别使用以TCM-199和NCSU-23为基础液的成熟液来成熟培养猪卵母细胞,NCSU-23组的分裂率,成熟率和囊胚率均高于TCM-199组。使用离子酶素激活方法和电激活方法进行对比,离子酶素激活后孤雌胚胎发育效果好,差异极显著(P<0.01)。     

青年娟姗母牛在发情周期中卵泡波变化规律的研究

家畜繁殖是畜牧业生产的首要环节,而母畜生殖系统的健康是发挥其繁殖力的基础。卵巢作为生殖系统的重要器官,其生理调节功能尤为重要。在20世纪70年代后期,B型超声波影像诊断技术用于大畜直肠检查和母畜的繁育,这是动物繁殖诊断技术的新革命。为了解青年娟姗母牛在发情周期中卵巢形态和卵泡发育的动态变化,进行卵泡的计数,以有效地控制卵巢功能,调整和控制青年娟姗母牛的繁殖生理过程,充分发挥优良青年娟姗母牛的繁殖潜力和遗传性能,研究利用超声影像技术对青年娟姗母牛卵泡波进行观察,现报道如下。1材料和方法1.1试验动物春季舍饲的健康、…     

我区首批试管牛犊在广西农学院陆续降生

广西首批试管牛犊于1990年4月6日至5月6日在广西农学院牧试站陆续降生,共4头,一公三母。这是本院卢克焕教授及其助手们采取国内外相结合的方式通力合作,刻苦攻关所取得的又一重大成果。广西农学院家畜繁殖研究室自1988年承担了国家及广西“黄牛胚胎工程”科研课题以来,全体研究人员在完全体外化培养胚胎的技术方面进行了深入细致的研究。从屠宰后的良种母牛的卵巢中采集卵母细胞进行体     

水牛卵母细胞孤雌激活方法的优化

为了研究离子霉素(Ion)在不同环境下对水牛孤雌激活效果的影响及水牛卵母细胞在6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)液中以聚集激活或分离激活方式对激活效果的影响。试验对比了水牛卵母细胞在25℃室温环境和38.5℃CO2培养箱环境下的Ion激活效果,还比较了水牛卵母细胞在6-DMAP液中进行聚集激活和分离激活的孤雌激活效果。结果表明:试验组8-细胞胚胎率(54.11%)和囊胚率(31.51%)均高于对照组的8-细胞胚胎率(51.68%)和囊胚率(27.52%),但无统计学差异;在6-DMAP液中分离激活组(1组)的囊胚率明显优于聚集激活组(2组)的囊胚率。     

给配种后5天的乳用牛注射HCG可提高怀孕率

在发情周期中 (配种前或配种后 ) ,血浆孕酮含量低的乳用牛怀孕率亦较低。人绒毛膜促性腺激素 (ＨＣＧ)是一种具有高度类似促黄体生成激素 (ＬＨ)活性的激素 ,它可以与卵巢上小黄体细胞中的ＬＨ受体结合 ,激发孕酮的产生。在乳用牛发情周期的第 5天注射一定量的ＨＣＧ ,会诱使第一卵泡发育波的优势卵泡排卵并形成一个功能性副黄体。从而提高黄体中期血浆孕酮的浓度 ,并改变卵泡波的模式。美国佛罗里达州立大学的Ｓａｎｔｏｓ等人将40 6头处于泌乳期 5 0— 1 5 0天的荷斯坦乳用牛 ,按照泌乳天数及胎次 (初产和经产 )这 2个因素 ,将乳用牛平衡…