转卵泡抑制素基因对绵羊肌源性细胞中 肌肉抑制素基因的调控

【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素（follistatin,FST）的真核表达载体pCFCDs-red和 pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞（SFFCs）、骨骼肌卫星细胞（SMSCs）和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和western blotting等方法进行检测分析。【结果】①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70%以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及western blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高。【结论】骨骼肌特异性启动子SP及α-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于α-actin。在肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用。     

不同激活方法对绒山羊卵母细胞孤雌发育的影响

为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟.将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7%乙醇+CHX处理,体外发育48 h后统计卵裂率、8-cell率,7～9 d后统计囊胚率和囊胚细胞数.结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.6±4.9%)显著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)及7%乙醇+CHX(97.5±1.4%)处理组(P＜0.05),而与7%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(81.3±5.8%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5+1.8%)、7%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1%)及7%乙醇+CHX(62.5±2.2%)处理组(P＜0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)处理组的囊胚率显著高于7%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)及7%乙醇+CHX(8.8±2.5%)处理组(P＜0.05);囊胚细胞数(200.0±14.0、169.6+11.4、187.0+8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8个)各组间没有明显差异)(P＞0.05).利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和CHX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量.IA23187或Ionomycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激活等相关研究提供了借鉴.     

绵羊羊水、胎儿肾脏组织中表达Oct-4细胞的分离培养及其分子学特性研究简

试验旨在建立从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,同时,通过实时荧光定量PCR（Real-time PCR）初步探索二者在分子生物学特性方面的联系及差异。采用0.01%胰酶培养液,从同一只受孕中期绵羊的羊水和胎儿肾脏组织中各分离1株细胞。Real-time PCR分析结果表明,从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离的细胞均表达胚胎干细胞相关标志基因Oct-4、胚胎生殖细胞标志基因SSEA-1、主要组织相容性抗原MHC-Ⅱ、细胞凋亡基因Bax及抑制细胞凋亡基因Bcl-2,不表达MHC-Ⅰ、Nanog及TERT,因此,将羊水中表达Oct-4的细胞暂命名为羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid stem cells,AFSC),胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞暂命名为肾脏组织干细胞(renal tissue stem cells,RTSC)。相对定量分析结果显示,二者的Oct-4、Bax及Bcl-2基因的相对表达量存在明显差异。绵羊羊水中表达Oct-4的细胞（AFSC）和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞（RTSC）体外悬浮培养7 d均能形成类胚体。试验成功建立了从绵羊羊水、胎儿肾脏组织中分离培养表达Oct-4细胞的新方法,实时荧光定量PCR分析初步显示绵羊羊水中表达Oct-4的细胞和胎儿肾脏组织中表达Oct-4的细胞具有相同的起源,并在体内处于一种动态的变化之中。     

广西南宁市县域化肥施用碳足迹及其减排潜力

【目的】分析广西南宁市县域的化肥碳足迹和碳减排潜力,为广西乃至全国制定差别化农业低碳政策和可行路径提供参考依据。【方法】基于生命周期理论,借鉴化肥碳足迹计算模型测算2005—2019年广西南宁市县域(武鸣区、隆安县、马山县、上林县、宾阳县和横州市)的化肥碳足迹和碳负荷,利用碳减排潜力模型分析科学施肥条件下广西南宁市县域的化肥碳减排潜力。【结果】广西南宁市县域的化肥碳足迹在2005—2019年间呈单峰变化,在2017年达峰值(74.54×10⁴ t CO₂eq),但2019年降至61.70×10⁴ t CO₂eq,下降17.23%,氮肥使用是化肥碳足迹增加的最主要原因;在6个县(区、市)中,武鸣区的化肥碳足迹最高,但土壤碳固存最大的区域也是武鸣区。2019年广西南宁市县域的化肥碳足迹普遍较低,平均为10.28×10⁴ t CO₂eq,但武鸣区、隆安县和宾阳县的化肥碳足迹较高,分别为31.48×10⁴、9.26×10⁴