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合成含有鸡法氏囊病毒抗原表位核酸序列的4条引物,利用SOE-PCR (重叠延伸PCR法)方法克隆得到含鸡法氏囊病毒多抗原表位串联肽的核酸序列。通过EcoR I和Sal I 两个酶切位点使该核酸序列插入原核表达载体(pET32a)。SDS-PAGE 实验结果表明鸡法氏囊病毒重组多抗原表位串联肽在大肠杆菌中的表达量为20%左右。Western blotting试验和免疫琼脂扩散沉淀试验(AGP)的结果均表明鸡法氏囊病毒重组多抗原表位串联肽具有明显的抗原性。 相似文献
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【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4左右时,分别转接至BMMY培养液诱导,1瓶每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇,另1瓶每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇,于24,48,72 h收集样品,备SDS-PAGE检测用。根据不同时间(24,48,72,96 h)诱导上清液表达量的差异,留用表达量最高时段的上清液,经初步纯化后,利用鸡胚成纤维细胞(CEF),分别测定重组酵母鸡α干扰素抑制MDV及NDV的能力。【结果】鸡α干扰素重组酵母菌在每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇诱导48 h时,或每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇诱导72 h时,重组酵母鸡α干扰素表达量均达到最高;且诱导上清液具有较好地抑制MDV、NDV的能力。【结论】获得了鸡α干扰素重组酵母菌小量发酵的最佳条件;获得的重组酵母鸡α干扰素对MDV和NDV有明显的抑制作用。 相似文献
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对含猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因插入的重组酵母菌株进行诱导表达,通过对诱导时间、重组酵母菌株、菌体密度、培养液pH、甲醇剂量等培养条件与表达产量关系的分析,对重组蛋白的表达条件进行了优化。优化后的条件为:28~30℃,225r/min振荡培养至BMGY中菌体OD600值为3.0~3.5时,将菌体转入相当于4倍体积BMGY,pH为6.0的BMMY培养基中培养72h,每24h加入甲醇至终浓度为总体积的0.5%~1.0%。在此优化条件下,重组蛋白的表达量可达275.38μg/mL,比较温度对重组蛋白降解率的影响后发现,培养物上清液应保存于-20℃。 相似文献
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【目的】优化芡种壳多酚提取工艺,并分析其对金黄色葡萄球菌的抑制作用和抑菌稳定性,为芡种壳的资源化利用提供参考依据。【方法】采用超声辅助法提取芡种壳多酚,以多酚提取率(Y)为评价指标,对超声时间(X1)、超声温度(X2)和料液比(X3)3个因素进行单因素和响应面试验,确定最佳提取工艺,初步纯化;采用琼脂扩散法研究芡种壳多酚对金黄色葡萄球菌的抑制活性,并测定最小抑菌浓度(MIC),同时考察温度、pH及金属离子浓度对芡种壳多酚稳定性的影响。【结果】3个因素对芡种壳多酚提取率影响的大小为:超声温度>料液比>超声时间,料液比及超声温度与料液比的交互作用对芡种壳多酚提取率有显著影响(P< 0.05),超声温度对多酚提取率有极显著影响(P< 0.01)。得到回归方程Y=14.57+0.064X1+0.26X2+0.11X3+0.079X1X2-0.018X1X3-0.18X2X3-0.11X12-0.54X22-0.19X32;最佳提取工艺为:超声时间39 min、超声温度72 ℃、料液比1:41,在此条件下,芡种壳多酚提取率为14.479%,与预测值(14.630%)接近;芡种壳多酚对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,MIC为0.1625 mg/mL;温度及Ca2+、Mg2+、K+、Na+4种金属离子对芡种壳多酚抑制金黄色葡萄球菌活性不具有显著影响(P> 0.05),而随着pH的增加,芡种壳多酚抑菌活性受到抑制。【结论】采用优化的超声辅助法可有效提取芡种壳中多酚物质,提取到的多酚对金黄色葡萄球菌的生长具有良好且较稳定的抑制效果。 相似文献
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近年来,随着食品安全问题频发,人们对"无化药"残留全生态畜禽产品的消费意愿越来越强烈。本文从疾病防治、采用生物制品与维生素及中药治疗、允许部分特殊鸡群中途退出等角度,分析实现"无化药"全生态养殖模式成为一种成熟的、可实地操作技术的具体方法和途径,以期为广大畜禽养殖户提供参考。 相似文献