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原核注射技术已经是目前制备转基因小鼠(Mus musculus)最有效的手段,但不同实验室所报道的转基因效率差异较大,效率不高仍是该技术的主要缺点.为提高转基因小鼠的制备效率,本研究对转基因小鼠制备过程中的原核注射的多个方面都进行了改进,尤其是在注射针直径、外源基因浓度、单/双原核注射以及胚胎移植等主要步骤上的进行了优化.实验结果表明,不同浓度的外源基因对转基因小鼠的阳性率有很大影响.外源基因为1.00、2.50、3.00和4.00 μg/mL浓度时,转基因小鼠阳性率分别0.67％、14.9％、30.6％和21.4％.其中,外源基因浓度在3.00 μg/mL极显著高于其他各组(P＜0.01).采用阳性率最高的3.00 μg/mL浓度又进行了单双/原核注射比较,发现转基因阳性率在进行双原核注射组显著高于单原核注射组(24.3％ vs.18.3％,P＜0.01).将显微注射后的2细胞时期胚胎经输卵管移植到0.5、1.5和2.5d假孕母鼠体内,产仔率分别为68.6％、67.6％和40.1％,转基因阳性率为17.4％、22.5％和10.1％.比较发现,0.5 d与1.5d代孕母鼠产仔率没有差异,但1.5d代孕组转基因阳性率(22.5％)显著高于其他组.结果表明,采用尽可能细的注射针、2～4 μg/mL的DNA载体浓度、双原核注射、1.5d的假孕母鼠和正确的胚胎移植操作,是获得高效率转基因小鼠的关键.本研究对从事动物转基因技术研究的实验室提供一些有益的借鉴. 相似文献
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母体妊娠期及泌乳期的营养水平对子代的生长发育有着非常重要的影响,为研究母体日粮中添加β-胡萝卜素和丁酸梭菌对子代鼠生长性能及血清生化指标的影响,本试验选用20只8周龄km小鼠进行配种,雌鼠受孕后随机分为对照组和试验组1、2、3、4。在妊娠第11天起分别饲喂基础日粮和添加0.5‰、1‰、1.5‰β-胡萝卜素和丁酸梭菌自制粮直至断奶。在子代鼠21 d断奶时,采集血液、肝、脾、胸腺、小肠和大肠各段测定器官指数和血清生化指标。结果表明：与对照组相比,试验组3小鼠体重、脾脏重量、空肠重量、回肠重量、盲肠重量、胸腺重量、肝脏重量极显著增加了54.54%、83.33%、50.00%、178.57%、88.89%、61.76%、67.5%(P <0.01),小鼠、回肠指数显著增加了和84.00%(P <0.05)。与对照组相比,试验组3小鼠谷丙转氨酶极显著降低了11.75%(P <0.01);试验组3小鼠γ-谷氨酰基转移酶显著升高了13.21%(P <0.05)。试验组3总胆汁酸显著升高了69.80%(P <0.05);试验组3血糖极显著升高了230.00%(P <... 相似文献
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UTX(ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeat X chromosome)和JMJD3(jumonji domain containing 3)是组蛋白H3赖氨酸27位三甲基化(histone H3 lysine 27 trimethylation,H3K27me3)去甲基化酶,可以调控动物机体生长、肌肉发育、调节代谢等重要生理功能.本研究根据小鼠(Mus musculus)UTX和JMJD3 mRNA序列设计3对引物,分别构建了体外转录载体pMD19T-T7UTX和pMD19T-T7JMJD3.分别将体外转录mRNA注射进小鼠卵母细胞,并利用免疫荧光方法对H3K27me3进行检测.转录产物经电泳检测,结果显示,UTX与JMJD3条带清晰与预期大小相符;通过显微注射mRNA的卵母细胞,其H3K27三甲基化修饰明显减少.本研究成功构建了UTX与JMJD3体外转录载体,并在细胞水平证明转录产物能够翻译出具有活性的酶,为利用此载体研究UTX与JMJD3在生长发育及相关疾病发生中的机制提供基础资料. 相似文献
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